微小毛霉凝乳酶的纯化和性质.pdfVIP

维普资讯 微 生 物 学 报 29 ({)： ^曲_ 叼 ∞ S 微小毛霉凝乳酶的纯化和性质 钱世钩 张地青 矫庆华 田开荣 盂广震 (中国科学院微生物研究所，北京) 微小毛霉 ( “∞，p#sillut)凝乳酶经乙醇分步沉淀 CM一纤维紊 、DEAE—sphdetA一 25和 Scpharosc2B柱层析提纯后 ，酶的比活由296提高到 3429u／mg，蛋白质收率为 17．9％。 经聚丙烯酰胺凝肢 电泳和免疫扩散法证明酶的纯度达到均一。 酶的分子量为41800越 顿。 蕊对 血红蛋 白的 K：m值 如 0-ol9mmaL[L。 酶 的等 电点为 pH4．3。对酶 的氨基酸 组成和含糖 量 也进行了铡定。 酶的化学修饰表明：酪氨酸、组氨酸 色氨酸、精氨酸以及巯基与酶的话性 无关，天冬氨酸的燕基是酶的必需基团，故此酶是一种典型的 冬氨酸蛋自酶。 关键词 凝乳酶 ；干酪 ；微小毛霉；提纯和性质 凝乳酶是干酪生产的关缝酶 。传统的 Sigma公司产品，乙二醛为 carIR。tt 公司产 凝 乳酶是从小公牛的第四 胃提取 ，随着对 品。 干 酪需求的增加及垒球性小牛 的短缺 ，杀 6--)菌种 、培养基和培养条件 见作者前报 “。 牛提取酶 已远远不能满足需要 ，很多牛凝 (三)租酶的摄取 乳酶 的代 用品应运而生 。 加水于固体培养响申，浸泡过夜，崭出畏提 微生物凝乳酶在干酪生产中具有很大 液 ，离心去渣 ，所得清液用于酶的纯化。 实用价值 。它具有培养方法简单、酶提取 (四)凝乳■、蛋 白水解醵和纤维素碑的活性 方便 、成本较低 、保持干酪风味等优点。 目 测定 前 ，世界上千酪生产所 用的酶三分之一 以 凝乳酶、疆白水解酶话性接 Arima“，所述方 上来 自微生物凝乳酶 。 通常 商 业 上 所 法测定。 纤维素酶话性接崔福绵Ⅲ 所述方法 测 用的仅有三种 ，即米黑毛霉 (Mucorm{· 定 ． ethe1)，微 小毛霉 (Mucorpusillus)和粟 疫 菌 (Endothia parasitlca) 的凝乳酶 。 率立于 1988年 2月 15日收到。 本文采甩的椎写名词： 我们从l9株毛霉中筛选出一株高产凝 PCMB：P—ch】of0mei-culibenzoicacid 乳酶的微小毛霉菌株 ，并完成了菌种培养， 对一氯汞苯 甲酸 ； DTNB ·2．2一odnh fo一5．5一dith o—di— 酶 的提取等试验 ，本文着重介绍酶的纯化 benz。ic dd 二硝基二硫基=苯 甲酷 ； 和性质。 Ko 】aDd试剂：2-轻基一，一硝基溴苯； DEP：Diethyl p，IocA 0natl 二 乙基 焦碗酸盐； 材 料 和 方 法 N—AI：N—Acetnm；djzoleN—Z酰蛛畦；