5.RN与A的合成.doc

第十三章 RNA的生物合成 以DNA为模板合成RNA的过程叫作转录(transcription)。转录是遗传信息表达或基因表达的第一阶段。 转录和DNA复制之间存在明显的区别。例如，DNA复制以DNA的两条链同时作为模板，可以将整个染色体复制成两个子染色体。而转录是有选择性的，染色体上只有特殊的某些基因或几组基因在某一时刻转录，而且往往利用1条DNA链作为模板。 除了某些RNA病毒以外，所有的RNA都是转录产生的。 转录除了产生三种主要的RNA:携带蛋白质合成信息的信使RNA(mRNA)、特异的氨基酸运输工具转运RNA(tRNA)和形成蛋白质合成场所的核糖体RNA (rRNA)。还包括一些其他的 RNA分子，它们往往具有结构功能或催化功能。 所有这些RNA都是由RNA聚合酶以DNA序列为模板拷贝合成。 真核生物中主要有三种类型RNA聚合酶，分别负责合成不同的 RNA，这三种RNA聚合酶是在进化中由存在于细菌中的单一的RNA聚合酶衍生而来的。 在DNA双链中，起转录模板作用的链叫作模板链(template strand)或负链。而另l条非转录模板链通常称为编码链(coding strand)或正链，其序列和转录产物相同(仅T替代U)。 RNA聚合酶结合于DNA特异的转录起始区——启动子(promoter)。 启动子通常靠近转录起点(start point)，即DNA中转录合成RNA的第一个碱基对，这个位点的核苷酸残基编号为+1。 某些启动子的转录起点不是固定的，而是选择性出现于相邻的两个或三个碱基对中。 RNA聚合酶合成RNA的方向为5′→3′，从转录起点沿RNA聚合酶运动的方向称为下游(downstream)，核苷酸残基编号依次为+2，+3……，而反方向为上游(up— stream)，核苷酸残基编号为-1，-2……。 为方便起见，通常将DNA序列从左(上游)向右(下游)书写，并且仅用编码链序列代表基因，因为它和RNA序列相同。 RNA聚合酶沿模板链运动合成RNA，遇终止信号停止。 从启动子到终止序列(terminatorsequence)之间的DNA序列叫作转录单位(transcription unit)。 1个转录单位可以表达产生1个RNA分子，它可能仅仅含有1个基因(主要是真核生物基因)，也可能含有多个基因(主要是原核基因)。 初级转录产物(primary transcript)是整个转录单位的RNA拷贝，它通常不稳定。 在原核细胞中，初级转录产物可能很快降解(如mRNA)，或切割加工产生成熟的RNA分子(如 rRNA和tRNA)。 在真核细胞中，mRNA初级转录产物末端被修饰，并经过切割加工才能产生成熟RNA分子。rRNA和tRNA分子也要经过前体加工。 原核基因的转录起始 60年代初，Jacob和Monod发现了细菌基因表达的主要形式操纵子(operon)，即1个启动子控制连在一起的多个结构基因的转录，并提出了E.coli的乳糖操纵子模型。不久， Ippen(1968年)和Pastan等(1970年)对这个模型作了若干重要补充。 一、RNA聚合酶和启动子 如同研究 DNA复制始于E.coli的DNA聚合酶，人们探索转录机制先从E.coli的RNA聚合酶入手。 细菌细胞中只有1种RNA聚合酶，它兼有合成mRNA、tRNA和rRNA的功能。 RNA聚合酶是E.coli细胞中较大的蛋白之一，每个细胞中大约有3 000个RNA聚合酶分子，其中一半在迅速生长的细胞中处于转录活性状态，而另一半和DNA松散结合并沿DNA随机运动，直到发现启动子。 E.coli细胞中的RNA聚合酶有几种形式，其主要形式由5个亚基组成，两个较大的亚基是β′μ(156Kd)和β(151Kd)，两个较小的α亚基(37Kd)，以及1个σ亚基(70Kd，只σ70). σ亚基是细菌基因的转录起始因子，它识别并结合于启动子，一旦转录开始就离开RNA聚合酶，代之以延伸因子结合于RNA聚合酶的核心酶(coreenzyme)。 E.coli的RNA聚合酶全酶中最常见的σ因子是σ70，它识别绝大多数基因的启动子的共有序列，并且使RNA聚合酶对启动子的亲和力比非启动子序列的亲和力高104倍。其他σ因子(σ28、σ32、σ38、σ54)分别识别特殊基因的启动子(见第15章)。 α亚基二聚体的结合位点处于启动子靠近上游的调节序列，它和转录频率(即启动子的强弱)直接相关。 β′亚基主要结合于DNA的转录模板链，而β亚基则结合合成RNA所需的底物NTP，并催化形成磷酸二酯键。 RNA聚合酶是1种多功能酶，它的功能包括： 寻找转录起点，即E.coli墓因组中的大约2 000个启动子。 解开一小段DNA双螺旋，以便产生单链DNA转录模板。 选择