遗传学大实验实验指导2.pdfVIP

遗传学大实验实验指导： 苯硫脲尝味的遗传学调查 邢万金，苏慧敏编写 内蒙古大学生命科学学院 2012. 2. 21 目 录 目录………………………………………………………………………1 遗传学大实验注意事项……………………………………………2 1. 实验目的……………………………………………………………3 2. 实验原理……………………………………………………………3 2.1 苯硫脲尝味的遗传形式…………………………………………3 2.2 人类苯硫脲尝味的基因…………………………………………4 3. 实验技术路线………………………………………………………5 4. 实验步骤……………………………………………………………6 4.1 讲解实验目的、实验原理、实验技术路线；主要仪器设备使用 方法、注意事项；实验方法及注意事项（4 学时）………………6 4.2 PTC 尝味能力的测定（5 学时）…………………………………7 4.3 人口腔上皮细胞总 DNA 的提取（1 学时）………………8 4.4 PCR 扩增PTC 基因片段（5 学时）……………………………10 4.5 PTC 基因PCR 扩增产物的电泳检测（3 学时）………………12 4.6 PTC 基因PCR 产物酶切（5 学时）………………………………13 4.7 PTC 基因酶切产物的电泳检测（3 学时）………………………14 4.8 实验结果遗传学分析……………………………………………15 5. 实验报告……………………………………………………………17 6. 实验扩展（选作）……………………………………………………17 7. 参考文献……………………………………………………………17 1 遗传学大实验注意事项 1．上实验课的学生每二人分为一个小组。 2 ．课前要提前预习实验内容，弄懂实验设计的原理，理清实验顺序。 3 ．由于实验内容多，时间短，多数实验需要同时或穿插进行，一定要做好统筹 安排。 4 ．本实验课中的所有单项实验都属于一个整体流程。实验时间安排上没有上下 午晚上等严格的作息安排，一切服从实验进度。 5 ．实验的每一步都要详细地记录操作内容、时间、步骤、结果等，以备查询！ 6 ．对任何自己不熟悉的实验仪器都不要随意操作（尤其是微量移液器！）。在操 作的过程中发现任何意外的现象都要及时向任课教师汇报。 7 ．写作实验报告和实验论文一定要文理通顺、逻辑清晰、图表说明详细，讨论 分析透彻（包括操作的错误）。 8．在实验室内不能大声喧哗。 9 ．在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾筐里（或先放在自己的桌面一 角），严禁随地投弃！特别注意对废弃细菌的杀灭和有毒垃圾的定点投放。 10．实验结束后要把用过的器皿清洗后归放整齐并清点数目，向教师汇报征得同 意后方可离开实验实。 11. 值日组的同学最后离开，等待清扫实验室的卫生，关闭门窗水电。 12．实验时损坏的任何物品都要及时申报。 2 1. 实验目的 （1）测定人群中PTC 尝味基因的表现型和基因型，理解孟德尔遗传基因型与表 现型的对应关系。 （2 ）了解酶切扩增多态序列（cleaved amplified polymorphic sequence，CAPS ） （又称为PCR-RFLP ）技术的原理，学会用 CAPS 技术检测单核苷酸多态性 （SNPs ）。在分子水平上测定PTC 尝味的基因型。 （3 ）计算群体中PTC 尝味的基因频率，判断群体是否达到Hardy-weiberg 平衡。 2. 实验原理 2.1 苯硫脲尝味的遗传形式 苯硫脲（phenylthiocarbamide ，PTC ）是硫脲的苯基衍生物（图 2.1 ），为白 色结晶粉末，因含有硫代酰胺基（N-C=S ）官能团而有苦涩味。能尝出1/750,000~ 1/