功能基因序列分析郭燕201483.ppt

二 已知功能基因的鉴定_以PQQ为例 PQQ是一种氧化还原酶的辅酶，广泛分布于植物、动物、微生物及周围环境中，具有多种生物学功能。 早在20世纪60年代，科学界开始对PQQ展开研究：先后在醋酸杆不动杆菌、荧光假单胞菌、欧文氏菌（Erwinia）等属中发现GDH含有一种相同的辅酶。它热稳定性好，能与亲核分子如氨基酸、巯基、氨等相互作用。 应用光谱、质谱等技术，研究发现苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶也有这种辅酶，晶体结构分析表明，该辅基是一个含有三个羧酸基团的醌类，确定其结构式为 4,5-二氢-4,5-二氧-1氢-吡咯并（2,3-f）喹啉-2,7,9-三羧酸，命名为“吡咯喹啉醌 ”简称PQQ。 PQQ 只能在某些革兰氏阴性菌中合成，具有生物学功能如下： Ⅰ 刺激细胞生长 刺激微生物细胞生长：缩短菌体的迟缓期，类似菌体必需生长因子，随着浓度增长，加快菌体生长速度，提高菌体细胞产量；缩短菌体的迟缓期，不影响菌体细胞的生长速度。 刺激植物细胞生长：刺激花粉萌发，其模式与刺激微生物生长的模式大致相同，即通过缩短生长停滞期以达到刺激植物生长的目的。 PQQ能够促进烟草种子萌发，提高脂肪酶活性和种子呼吸速率， 还能够通过促进生长素和细胞分裂素合成，促进分子水平基因调控，从而提高植物细胞新陈代谢而发挥促进植物生长的作用。 在冬小麦花退化高峰的孕穗期和生长代谢旺盛期，喷洒PQQ 可以提高叶片中叶绿素含量，加快植物的光合作用，提高谷丙转氨酶和硝酸还原酶的活性，从而调节植株体内生理代谢功能，有益于改善植株营养供给，减少穗部小花败育，提高麦穗结实率。 2008 年，Choi 等报道了一种植物根际促生长细菌 ( plant growth promoting rhizobacteria，PGPR) Pseudomonas fluorescens B16，该菌株为合成 PQQ的野生型菌株，协和培养该菌与植物可以增加西红柿花数量、植株高度、果实数量和果实总重量，而所有不能合成 PQQ 的突变型菌株则没有此作用效果。因此，推测 PQQ 是 PGPR 发挥作用的重要原因之一。 刺激人体细胞生长：Naito 等报道低浓度 PQQ ( 0.003～30 μM)显著增强人成纤维细胞 DNA 的合成，并且显著增加细胞密度，相比之下，PQQ 的刺激作用优于成纤维细胞生长因子和胰岛素等生长因子，与上皮细胞生长因子的作用相当； 但当PQQ浓度达到750～1500 μM 时，DNA 合成受到抑制引起细胞死亡。国内（熊顺华等）也先后报道了适量浓度的 PQQ对大鼠皮质神经元和海马区神经元的生长速度有促进作用，但 PQQ 的浓度过高会产生毒性。 Ⅱ PQQ 是动物生长、发育和繁殖必需的营养因子 作为赖氨酰氧化酶的辅助因子：Kasahara 和 Kato 在前人研究基础上，通过比对酵母、果蝇以及小鼠参与赖氨酸代谢通路的同源蛋白，间接地证明了小鼠体内的赖胺酰氧化酶是以PQQ 作为辅助因子，建议将 PQQ 作为一种新的 B族维生素。 然而，Felton、Anthony 和 Ｒucker分别发表文章否定了 Kasahara 和 Kato 得出的实验结论。Ｒucker 等认为，从药理与营养学角度来分析，PQQ 定义为一种维生素的证据还不足，只能说它是一种重要的生物因子。因为不同物种对于维生素的需求存在较大差异，例如，维生素 C 是人类、灵长类生物必需的，但是鼠却不需要。因此，对人类来说 PQQ 是否是一种维生素，需要进一步研究证实。 Ⅲ PQQ 对自由基有清除作用，可以保护机体减少氧化损伤 在正常生理条件下，生物体保持一种自稳态，自由基的产生和清除维持动态平衡状态，自由基产生过少或过多都会对机体健康产生影响。PQQ 能够在没有谷胱甘肽 ( GSH)参与下直接清除过量的自由基。PQQ 清除自由基的效力是抗坏血酸的50～100 倍。如下3个方面： 保护心脏免受氧化损伤：PQQ 能够清除由缺氧再灌注产生的 ROS( reactive oxygen species）， 显著降低心脏中乳酸脱氢酶的释放，在黄素还原酶催化作用下，催化产物还能够降低血红蛋白过氧化状态，消除缺氧再灌注对心肌的损伤。Tao 等报道，PQQ 能够抑制H2O2 诱导的大鼠心肌细胞 ＲOS 的产生、线粒体膜电位的降低，降低氧化应激、抑制线粒体功能的失活和保护大鼠心肌细胞等作用。 防止眼晶状体损伤及肝脏脂质过氧化：白内障的发生与自由基水平升高有关。PQQ能够提高晶状体中 GSH 水平防止氧化应激对晶状体的损伤，保证晶状体代谢的正常进行，从而避免了因晶状体蛋白变性而发生的混浊，缓解白内障症状。同样的原理，PQQ 可以通过提高肝脏中GSH 水平，从而抑制肝脏内脂质过氧化发生，促进胆绿素通