用蛋白质作探针共振瑞利散射和共振非线性散射法测定硫酸软骨素A.pdfVIP

第27卷 第 7期 应 用 化 学 Vo1．27No．7 2010年 7月 CHINESEJOURNALOFAPPLIEDCHEMISTRY July2010 用蛋白质作探针共振瑞利散射和共振非线性 散射法测定硫酸软骨素 A 刘 健 刘忠芳 胡小莉 孔 玲 刘绍璞 (发光与实时分析教育部重点实验室，西南大学化学化工学院 重庆400715) 摘 要 在pH值为2．5—4．0的BR缓冲溶液介质中，牛血清 白蛋 白(BSA)、糜蛋 白酶 (Chy)和0c-淀粉酶 (—Amy)等蛋白质与酸性多糖硫酸软骨素A(cs)形成结合物。此时将会使共振瑞利散射 (RRS)和二级散射 (SOS)、倍频散射 (FDS)等共振非线性散射的强度显著增大。在蛋白质过量时，3种散射增强(△，R △，s。和 △， )均在一定范围内与cs的浓度成正比，方法具有高灵敏度。当用Chy、BSA和 -Amy作探针时，3种散射 法对于cs的检出限分别在 1．4—5．8 g／L、2．0—13．2 g／L和 1．8～9．6 g／L。其中以Chy-CS体系的RRS 法最灵敏(检出限1．4tLg／L)，可用于痕量cs的测定。研究了反应体系的RRS、SOS和FDS的光谱特征、适宜 的反应条件和影响因素，并以Chy．CS体系为例考察了共存物质的影响，方法有良好的选择性 ，将其用于滴眼 液中CS的测定，取得了较好的结果。 关键词 蛋白质，硫酸软骨素A，共振瑞利散射，二级散射，倍频散射 中图分类号：0657．3 文献标识码：A 文章编号 ：1000-O518(2010)07-0842-07 DOI：10．3724／SP．J．1095．2010．90649 硫酸软骨素(chondroitinsulfate，CS)是由D．葡萄醛酸和Ⅳ-乙酰一D一氨基半乳糖双糖单元重复组成的 一 种酸性粘多糖，广泛用于治疗角膜炎、角膜溃疡、角膜损伤、动脉粥样硬化性疾病、心绞痛、高脂血症 等，还用于神经性头痛、神经痛、关节痛等的辅助治疗。硫酸软骨素能与某些核心蛋 白质作用形成蛋 白 聚糖，对神经发育及神经损伤后修复起抑制作用 ；且其本身对神经元的生长表现出刺激和削弱的双 重作用 ]。因此，研究硫酸软骨素与蛋 白质的作用并由此发展一种测定硫酸软骨素的新方法具有重要 的意义 。 目前，测定硫酸软骨素 (cs)的方法主要有分光光度法。它们主要基于染料与Cs之间的相互作用 导致吸收光谱和吸光度的变化，如咔唑 I4J、间苯三酚 J、结晶紫 、溴酚蓝 、4一氨基一3一肼基-5一巯基- 1，2，4_三：唑 等作显色剂的分光光度法。这类方法的主要不足是灵敏度较低。它们对CS的定量限一般 在10—100mg／L，而且有的方法还不够简便 (如Emson．Morgan法和咔唑法)。高效液相色谱紫外检测法 可用于cs的测定，方法有高的准确度，但通常需进行前处理，操作较为繁琐，而且灵敏度也不高 (定量 限一般在 10—400mg／L)E9-141。此外如离子色谱法 ¨、极谱法n 和循环伏安法 ¨等电化学法和化学 发光法 引也能用于cS的测定，但仍然存在灵敏度低的缺点(定量限在 1．0～25mg／L之间)。近年来发 现，用软骨素酶ABC的MALDI—TOF质谱法H测定cs具有高灵敏度，检出限可达500fmol，但仪器价格 昂贵、运行费用较高。因此，进一步研究和发展灵敏度高、简便快速测定CS的方法有重要意义。 共振瑞利散射(RRS)和二级散射 (SOS)、倍频散射 (FDS)等共振非线性散射是近年来发展起来的 新分析技术。因其高灵敏度和简易性而受到人们的关注 I2 ，在生物大分子、药物 I2 、有机化合 物 和无机离子 I2的分析中得到了越来越多的应用。此技术也用于肝素 、透明质酸 。。。1] 和硫酸软骨素 等多糖类的测定。它们主要利用某些染料和阳离子表面活性剂等小分子与多糖的相 互作用。例如用固绿 、结晶紫 或阳离子表面活性剂_3作探针共振瑞利散射法测定硫酸软骨素，方 法具有高灵敏度，检出限可低至0．011～0．019mg／L。 2009—10-09收稿，2010-0128修回