生物医学电镜技术与细胞及组织超微结构总论.ppt

生物医学电镜技术与细胞及组织超微结构 Biomedical Electron Microscopy and Cell Tissue Ultrastructure （一）、电镜技术发展简史 ⑴、Robert Hooke(1665) Leeuwenhoek(1674)发现细胞； ⑵、19世纪30年代,Schleiden(1938) Schwann（1839）提出 细胞学说(cell theory)； ⑶、1932年，德国Knoll Ruska建造第一台电镜(Electron Microscope,EM, ×12);1933～1934年,电镜的性能已达光镜的分辨率0.2um, ×10,000；1938-1939，第一批商品电镜问世，分辨率达100A； 由于受到样品制备技术的限制，20世纪50年代初，电镜技术才开始运用于生物医学方面的研究。 ⑷、细胞超微结构的分子细胞生物学的基础。 (二)、分辨率与形态研究的关系 1、分辨率（Resolution） 又称分辩本领（Resolving power），是将邻近两点清晰区分、辩认的能力，用能被辨认的邻近两点的距离表示。 肉眼：在明视距离（25cm）时，为0.25mm； LM：可见光的平均波长为500nm，r=λ/2，LM的极限分辨率为0.25um; EM：电子波波长短,且波长随加速电压的增高而更短，目前较好的电镜分辨率为0.2nm左右,比LM提高1000倍,比人眼提高100万倍. (注)：①由于电镜存在各种像差（包括球差、像散等）,限制了分辨率,不能真正达到其波长的一半; ②分辨率还受到许多因素的影响,如切片的厚度等，超薄切片较薄 时,分辨率可达1～2.5nm,切片较厚时,实际分辨率为5～10nm. (三)、基本原理、构造及电镜的类型 电镜的基本构造及原理 ①、电子束主要特点： a、由电子组成，真空中直线前进，具波动特性； b、电子束受电力和磁力作用； c、电子束照射样品时，能透过极薄样品，得到透射电子，或产生二次电子，特征X射线，背散射电子等。 ②、电镜的基本构造：以透射电镜 为例 ③、超高压电镜（High Voltage Electron Microscope, HVEM）； 常规电镜加速电压一般在200KV以下，如果加速电压在500KV以上，则称为HVEM。 特点:观察厚切片(0.5-3um)，提高分辨率。观察到原子水平，期望观察生活标本（含水份） ④、分析电镜（ Electron Microscope Microanalyser， EMMA）； I、波谱仪（wavelength-dispersive spectrometer ， WDS） II、能谱仪（energy-dispersive spectrometer ，EDS） ⑤、扫描探针显微镜(Scanning probe microscope,SPM): 原子力显微镜(atomic force microscope,AFM)； 扫描隧道显微镜(scanning tunneling microscope,STM)。 ③、扫描电镜的二次成像原理 扫描电镜一般可分为四个重要的组成部分： a、形成电子探针的电子光学系统； b、探针的电子束打击样品表面形成信息信号； c、检测系统； d、电子偏转系统（是电子探针在样品表面按一定顺序扫描，并且使这一扫描过程与阴极射线管的电子束在荧光屏上移动同步）。 扫描电镜的结构示意图： (四)、细胞超微结构研究的展望 ①、二维 三维，如三维重建技术； ②、从单纯的形态观察,深入到对其功能、代谢、化学组成、分子结构及元素分布的研究。如X线显微分析(electron probe x-ray microanalysis)； ③、定性描述 定量测定方向发展，如电镜形态测量技术（morphometry）； ④、从经化学固定的结构向活细胞整体方向发展，如超高压电镜技术的应用； ⑤、仪器设备向小型化方向发展。 本课程的重点内容 ①电镜生物样品制备常规技术及应用范围; ②电镜图片的分析要领; ③正常细胞超微结构理论和超微病理内容的基本掌握。 学习要点 ①重视图像的分析和识别； ②注意LM和EM结合； ③形态与功能的联系； ④正常超微