第四讲dna和蛋白质技术与植物有效成分的提取上课.pptVIP

四、植物有效成分提取实例1（玫瑰精油的提取） 2、理化性质 沸点高,能充分溶解胡萝卜素,且不与水混溶. 对人体无毒性或毒性相对较小 不易燃 易与产品分离，不影响产品质量 比较本实验纸层析法和叶绿素的提取和分离纸层析法 1、目的不同： ①本实验： β-胡萝卜素粗品鉴定 ②必修1 ：分离叶绿体中的色素 2、对滤纸处理不同 ①本实验：底下不需要剪角 ②必修1： 底下剪去两角 3、点样不同 ①本实验： A、D点标准样品，B、C点提取样品 ②必修1：画滤液细线 4、结果不同 ①本实验：滤纸条上呈现胡萝卜素层析带和杂质色素带 ②必修1：滤纸条上呈现四条颜色、宽度不同的色素带 * 细胞内DNA复制与PCR技术的比较 细胞内DNA复制 PCR 不 同 点 解旋 在解旋酶作用下，边解旋边复制 80--100℃的温度范围内双链完全分开 酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶 Taq DNA聚合酶 引物 RNA DNA或RNA 温度 体内温和条件 高温 相 同 点 ①需提供DNA复制的模板 ②四种脱氧核苷酸为原料； ③子链延伸的方向都是从5′端到3′端； 1．凝胶色谱法：也称分配色谱法，是根据 相对分子量大小分离蛋白质的方法。相对分子质量较小的移动速度较慢，而相对分子质量较大的无法进入凝胶内部，移动速度较快。 2．缓冲溶液：能够抵制外界的 酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变。 3．电泳：带电粒子在 电场的作用下发生迁移的过程。 4．样品处理：红细胞的洗涤→血红蛋白的释放→分离血红蛋白溶液→透析。 5．凝胶色谱操作：凝胶色谱柱的制作→凝胶色谱柱的填装→样品的加入和洗脱 SDS→聚丙烯酰胺凝胶电泳。 二、蛋白质的提取与分离 2.实验操作程序 (1)样品处理 ①红细胞的洗涤：除去血浆蛋白等杂质，以利于后续步骤的分离纯化。 ②血红蛋白的释放：使红细胞涨破，血红蛋白释放出来。 ③分离血红蛋白溶液：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来，便于下一步对血红蛋白的纯化。 (2)粗分离——透析：除去样品中相对分子量较小的杂质。取1 mL的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300 mL的物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液中(pH为7.0)，透析12 h。 (3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。 (4)纯度鉴定：一般用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法来测定蛋白质的分子量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。 提取方法 水蒸气蒸馏法 压榨法 有机溶剂萃取法 实验原理 利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携 带出来 通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油 使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂获得芳香油 方法步骤 ①水蒸气蒸馏 ②分离油层 ③除水过滤 ①石灰水浸泡、漂洗 ②压榨、过滤、静置 ③再次过滤 ①粉碎、干燥 ②萃取、过滤 ③浓缩 三、植物有效成分的提取 提取方法 水蒸气蒸馏法 压榨法 有机溶剂萃取法 适用范围 适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油 适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取 适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡在有机溶液中 优点 简单易行，便于分离 生产成本低，易保持原料原有的结构和功能 出油率高，易分离 局限性 水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题 分离较为困难，出油率相对较低 使用的有机溶剂处理不当会影响芳香油的质量 1、提取方法： 2、实验原理： 3、实验装置： 水蒸气蒸馏法 利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来 水蒸气蒸馏装置 （包括：水中蒸馏法、水上蒸馏法、水气蒸馏法） 4、实验流程： 鲜玫瑰花 + 清水 水蒸气 蒸馏 油水 混合物 （乳白色乳浊液） 加NaCl 目的：促进油水分层 用分液漏斗将两层分开 分离 油层 加无水 Na2SO4 除水 玫瑰油 1、玫瑰采摘期盛花期 2、玫瑰花瓣：清水=1:4 水中蒸馏 过滤 除Na2SO4 2、橘皮精油的提取具体操作步骤 1、橘皮精油的主要成分： 柠檬烯（无色透明） 石灰水浸泡 静置 过滤 压榨 漂洗 再次过滤 ：破坏细胞结构，分解果胶且防止滑脱，提高出油率。 ：流水漂洗后沥干水分 ：压榨时加入相当于橘皮0.25%的NaHCO3和5%的Na2SO4,并调节PH至7~8 ：先用普通布袋过滤除去固体物和残渣，然后离心进一步除去质量较小的残留固体物,再用分夜漏斗或吸管将上层的橘皮油分离出来 ：静置5~7d，吸管吸出上层澄清橘皮精油 橘皮精油 四、植物有效成分提取实例2（橘皮精油的提取） 根据碳碳双键的数目 α-胡萝卜素 β-胡萝卜素 γ-胡萝卜素 最主要组成成分 1、分类 橘黄色结晶，化学性质比较稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂 3、工业上提取天然β-胡萝卜素的方法 植物 大面积养殖的岩藻 微生物的发酵生产 四、植物有效成分提取实例3（胡