霍乱弧菌实验室检验技术20060409.pptVIP

霍乱弧菌 实验室检验技术  朝阳区疾病预防控制中心 检测检验中心 2006.4 一. 霍乱及其病原体的研究简史 二. 霍乱弧菌在弧菌科的分类地位 三. 霍乱弧菌形态学 四. 微生物学特性 五. 主要抗原和血清分型 六. 霍乱弧菌的抵抗力 七. 霍乱弧菌对抗菌药的敏感性 八. 霍乱弧菌变异 九. 常规检验技术 一. 霍乱及其病原体的研究简史 ﹙一﹚霍乱概念： 霍乱（Cholera）是由O1血清群和O139血清群霍乱弧菌﹙Vibrio cholerae ﹚引起的急性肠道传染病﹙本病以腹泻大量水样便并拌有脱水症状为特征﹚，其发病急，传播快，波及范围广，可引起大流行。是国际检疫传染病之一，也是《中华人民共和国传染病防治法》规定的甲类传染病之一。 ﹙二﹚世界上霍乱的流行历史： 霍乱共流行七次，均为O1群霍乱弧菌引起。 前六次由 O1 群古典型霍乱弧菌引起，第七次由O1 群埃尔托型霍乱弧菌引起。 这七次大流行的年数依次是 7、12、18、11、14、25、12。 ﹙三﹚霍乱弧菌病原体的发现简史 1.古典型霍乱弧菌的发现 1883年第五次霍乱弧菌大流行，德国科学 家郭霍（Robeit Koch）在埃及用显微镜染色检 查法和培养法发现古典型霍乱弧菌。随后郭霍又 在埃及进行了大量的研究，1884年7月正式公布 了古典型霍乱弧菌的发现。 2 .埃尔托型霍乱弧菌的发现 第七次霍乱弧菌大流行之前1905年德国人戈奇利希﹙F.Gotschlicn﹚发现了埃尔托型霍乱弧菌。该菌引起第七次霍乱弧菌大流行﹙1961~1972﹚，至今世界各地分离的O1霍乱弧菌均为O1埃尔托型霍乱弧菌。 埃尔托型霍乱弧菌可在某些水生 动植物中生存如甲鱼、牛蛙等。例如 2002年在鲈鱼中、2003年、2004和 2005年均在甲鱼中发现霍乱弧菌。致 使水体成为霍乱弧菌的重要储存场所。 三、霍乱弧菌的形态学 （一）形态与染色 （二）菌细胞结构 1、细胞壁 ：特异性多糖（O抗原） 2、细胞膜 3、细胞浆：质粒 4、核质：双股一环状DNA 5、荚膜 6、鞭毛：长而粗（H抗原），起运动作用。 四.微生物学特性: （ 一）. 形态、染色: 自病人新分离的霍乱弧菌为革兰氏阴 性短小稍弯曲的杆菌，无芽胞，菌体两端钝 圆或稍平，菌体单端有一根鞭毛，长可达菌 体长度的4～5倍，运动极为活泼。 （二）培养特性 生长要求： 1、营养要求简单 在普通培养基上生长良好，属兼性厌氧菌。 2、怕酸嗜碱 可繁殖的酸碱度（pH）为6.0～9.2，适宜的pH为7.2～7.4。初次分离，常用 pH8.5的碱性蛋白胨水。培养增菌6-8h，可抑制其他杂菌的生长。 3、耐一定浓度的盐 4、需氧性强、又具兼性厌氧 5、怕冷喜湿嗜中温 生长温度为16～42℃，培养温度以37℃最为适宜。 6. 在培养基上的生长特性 液体培养基: 碱性蛋白胨水 固体培养基：庆大平板 半固体培养基 五、霍乱弧菌的主要抗原和血清分型 （一）鞭毛抗原（H抗原）：特异性低，不耐热，100℃ 2h 即被破坏。 （二）菌体抗原（O抗原） ：特异性强，耐热，具有群和型特异性。 根据O抗原的不同霍乱弧菌已有200个以上的O血清群 1. O1群 （1）根据O抗原成分的不同分群特异性抗原因子（A抗原因子）和型特异性抗原因子（B和C抗原因子） 六.霍乱弧菌的抵抗力 （一）对温度的耐受力 1. 无芽胞，对热耐受力不强。零度以下可活14天左右。 2. 实验室保存菌种时放室温，不放冰箱 （二） 对干燥的耐受力敏感，干燥的玻片上3小时左右死亡。 （三）对各种常用消毒剂如含氯制剂、碘制剂均为敏感。 (四) 对强氧化剂极为敏感。 （五）在有藻类或甲壳类等生物的淡盐水中可 进一步使其存活时间延长. （六）在条件适宜时可以繁殖，甚至越冬。 （七）加热是杀死霍乱弧菌的最好方法。 七.对抗菌药的敏感性 人群对霍乱弧菌普遍易