原创力文档- 1、本文档共86页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
查看更多
国家精品课程基因工程课件chapter2
第二章核酸的分离纯化
Chapter 2 Extraction
Purification of Nucleic Acid
2009-11-26 1
第一节 核酸的分离纯化
2009-11-26 2
2009-11-26 3
一、核酸分离、纯化原则
I. 保持核酸分子一级结构的完整性
II. 防止核酸的生物降解
二、分离提取核酸的主要步骤
I. 细胞的破碎
II. 核蛋白的解聚、变性蛋白的去除
III. 核酸的沉淀
IV. 核酸的浓度测定
V. 核酸的保存
2009-11-26 4
前 言
核酸(nucleic acid)是遗传信息的携带者，
是基因表达的物质基础。
无论是进行核酸结构还是功能研究，首
先需要对核酸进行分离和纯化。
核酸样品质量将直接关系到实验的成败。
2009-11-26 5
一、核酸分离、纯化原则
(一) 保持核酸分子一级结构的完整性
1 意义
遗传信息全部储存在一级结构之中，核酸
的— 级结构还决定其高级结构的形式以及和其他
生物大分子结合的方式。
2 分离核酸原则：
①温度不要过高；
②控制一定的pH值范围(pH值5-9);
③保持一定的离子强度;
④减少物理因素对核酸降解的机械剪切力。
2009-11-26 6
(二) 防止核酸的生物降解
细胞内或外来的各种核酸酶能消化核
酸链中的磷酸二酯键，破坏核酸一级结构。
所用器械和一些试剂需高温灭菌，提
取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。
2009-11-26 7
1 DNA酶抑制剂
1）金属离子螯合剂：
DNA 酶需要金属二价离子Mg2+ 、Ca2+ 的激
活，因此使用金属二价离子螯合剂，可抑制
DNA 酶活性。如EDTA-Na 等。
2
2）阴离于型表面活性剂：
如SDS ，该试剂除对核酸酶有抑制作用外，还
能使蛋白质变性，并与变性蛋白结合成带负
电荷的复合物，该复合物在高盐溶液中沉淀。
2009-11-26 8
2 RNA 酶(RNase)抑制剂
RNAase 分布广泛，极易污染样品，
而且耐高温、耐酸、耐碱，不宜失活。
常用的RNase抑制剂有：
(1) 皂土(bentonite)
作用机制：皂土带负电荷，能吸附
RNase ，使其失活。
2009-11-26 9
(2) DEPC( 二乙基焦碳酸盐) (C H OCOOCOOC H )
2 5 2 5
粘性液体
文档评论（0）