韩鹏倩论文.docVIP

1 绪论 葡萄球菌广泛存在于自然界中，属于条件性致病菌，葡萄球菌属分三个种(金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、痛生葡萄球菌)，主要是金黄色葡萄球菌。病料涂片显微镜下观察，它的形状为圆形或卵圆形，直径0.7-l微米。在固体培养基上培养的葡萄球菌像一串串葡萄似的排列着[1]。葡萄球菌（Staphylococcus）是革兰氏阳性球菌，多数为非致病菌，少数可导致疾病。葡萄球菌是柯赫（R．Koch．1878年）、巴斯德（L．Pasteur，1880年）和奥格斯顿（A．Og-ston，1881年）从浓液中发现的，但通过纯培养并进行详细研究的是F.J. Rosenbach（1884年）。近年来国内外有过大量报道，特别是国内随着养鸡业的发展，鸡葡萄球菌病的发生越来越严重，但在诊断该病及采取的防治措施方面都不够得力。因此，诊断与防治本病对于降低养鸡业的经济损失，促进我国养殖业的发展具有重要意义。本文通过对病原菌的直接镜检、凝固酶试验、分离、生化试验，及动物实验、药敏试验等获得对鸡葡萄球菌病有效的诊断方法防治。 2 材料 2.1 病例来源与实验动物 石家庄某发病鸡场的35日龄发病鸡。35日龄健康雏鸡20只，购自石家庄某肉鸡场。 2.2 培养基与试剂 普通琼脂培养基、5％绵羊血液琼脂培养基，各种糖、醇培养基及试剂由上海市医学化验所试剂厂生产，或按有关文献自行配制。 2.3 仪器 超净工作台（苏州净化设备有限公司，SW-CJ-2FD型）；显微镜（北京麦克奥迪仪器公司）；恒温培养箱（上海一恒科技有限公司，GHP-9080型）；手提式压力蒸汽灭菌锅（上海华线医用核子仪器）。 2.4 药敏纸片 庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星、恩诺沙星、链霉素等药敏纸片均购自北京天坛生物技术开发公司，-20℃保存，批 3 方法 3.1 流行病学调查 通过询问养殖户和对附近鸡场进行病例调查，了解鸡的发病情况。 3.2 临床症状与病理剖检变化 对病鸡的精神状态及症状进行观察，对病死鸡剖检进行内脏器官病变观察。 3.3 病料涂片染色镜检 取病死雏鸡和处于濒死状态雏鸡的肝脏、肺脏组织涂片，进行革兰氏染色，显微镜下观察其形态特征。 3.4 病原分离培养与观察 在超净工作台上用接种环蘸取病鸡肝、肺组织液，采用分区划线法接种于普通琼脂培养基，5％绵羊血液琼脂培养基，置于37℃恒温箱培养24h后，观察细菌生长情况及菌落特征。 3.5 生化试验 血浆凝固酶试验，在无菌条件下，用小片滤纸沾取病鸡肝脏组织液放于载玻片上，其上再滴一滴加有抗凝剂的兔血，用无菌牙签搅拌，观察；糖发酵试验，将细菌分离物分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖和甘露醇的培养基中，置37℃恒温箱内培养24-48h后，观察细菌分离物的生化反应特性。 3.6 动物回归试验 试验动物为35日龄健康鸡20只，取所分离细菌在普通培养基中37℃培养18h，按0.5ml/只，分别给鸡皮下注射。 3.7 药敏试验 方法采用纸片扩散法（K-B法）。将分离到的菌株分别均匀涂于普通琼脂培养基上，贴上庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星、恩诺沙星、青霉素、氯霉素、红霉素、头孢菌素、链霉素的药敏纸片，37℃恒温培养24h，观察结果。判定依据：测量抑菌圈直径（包括纸片直径），按其大小报告高度敏感，中度敏感或耐药，直径小于10mm为耐药，直径大于10mm小于15mm为中度敏感，直径大于15mm为高度敏感[5]。 4结果 4.1 流行病学调查 该发病鸡场为2009年新建鸡场，饲养1500多只肉鸡采用集约化饲养模式，粪便清理不及时，周围环境污染严重，发病鸡舍的地面、网架(面)、墙壁、水槽等处均有粪便污染。并且禽舍内通风不良、空气潮湿；鸡群过大拥挤；鸡只互啄现象严重。经调查85%发病鸡病因可归于皮肤或粘膜表面的破损。该鸡场在2011年11月下旬开始出现病变，如关节肿大，鸡冠肉髯或趾部破溃并有污秽渗出物流出等。以35日龄鸡多发。2~5天出现死亡，截止到年底，共死亡238只。其附近鸡场也有发生，且死亡率较高。 4.2 临床症状与病理剖检变化 此次鸡场发病鸡情况：急性病例，35日龄的鸡多发生皮肤破溃，呈皮肤病经过，病程短。病鸡体温升高，达42.5℃以上，精神沉郁、食欲减退、闭眼缩颈，部分病鸡下痢，排灰白色或绿色粪便，鸡冠苍白，胸、翅部羽毛脱落，胸、腿部皮下有出血点，一般发病后2～5天死亡。慢性病例，除有减食和精神欠佳外，最突出的是下痢，多个关节发生炎性肿胀，病鸡逐渐消瘦，约经十多天，经治疗后能康复，部分病例因关节长时间肿大而畸形，因此慢性病例的鸡康复后多见跛行。 剖检可见变化情况：急性死亡病鸡冠多呈紫黑色，皮肤发绀，剪开皮肤可见整个胸、腹部皮下充血，积有大量胶冻样黄红色水肿液，剖开素囊观察有积食，剖开肿大的