基因工程第一章核酸的制备.pptVIP

已知序列 未知序列 未知序列 连接酶 2）不对称PCR (asymmetric PCR) 目的：扩增产生特异长度的单链DNA。 方法：采用两种不同浓度的引物，最佳比例一 般是0.01∶0.5μM。 用途：制备核酸序列测定的模板 制备杂交探针 基因组DNA结构功能的研究 高浓度引物 低浓度引物 3）RT－PCR: 方法：以反转录的cDNA作模板所进行的PCR反应, 用途： 测定基因表达的强度和鉴定已转录序列是否发生突变, 克隆mRNA的5’和3’末端序列, 以及从非常少量的mRNA样品构建大容量的cDNA文库。 逆转录酶 ＤＮＡ聚合酶 mRNA cDNA 杂化双链 PCR扩增 4）多重PCR：在一个反应体系中使用一对以上引物的PCR称，其结果是产生多个PCR产物，用于检测特定基因序列的存在或缺失。 电泳 引物 5）实时定量PCR技术 实时定量PCR（也称TaqMan PCR, FQ-PCR）是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术， 该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的。 利用设计好的引物，将不同基因，或基因的不同区域连接起来。 6）融合PCR技术 引物（Primer） 基因A 基因B 4.4.2 PCR技术应用 研究 基因克隆，分子检测，DNA测序，