银染色方法与其在细胞遗传学中的应用1).pdf

遗传 HEREDITAS(Beijing) 2(4):29-321980 银染色方法及其在细胞遗传学中的应用’‘ 施 立 明 （中国科学院昆明动物研究所，昆明） 硝酸银染色在细胞化学中的应用已有很久 色、着丝点呈棕色，NOR为黑色时，立即水洗， 的历史，但用以研究染色体却是近几年的事。 干燥。 Goo即asture等[21应用称为Ag-AS的银染色技 2.Ag-I染色[41［与上法同样滴加AgNO3 术，使9种哺乳动物的核仁组织者 (NOR）特 液，覆以盖片，然后放于培养皿中，370C温育18 异性染为黑色。这种银染色阳性的NOR称为 小时或500C温育2-5小时。水洗，镜检 （以相 Ag-NOR。经与Hsu等[31用原位分子杂交得到 差显微镜观察）。温育适度时，染色体不染色， 的结果相比较，证明Ag-NOR也就是18S+28S NOR则呈黑色。为方便起见，也可用2外Gie- 核糖体基因 r（DNA）的分布区。嗣后，在肿瘤 msa或醋酸地衣红复染，但注意染色不可过度。 细胞遗传学、进化遗传学、临床遗传学、体细胞 就我们的体会，温育的温度和时间随不同的材 遗传学等方面，银染色的应用日趋广泛。技术本 料而异，而且还受许多因素的影响。 身也不断有所改进和发展，现被认为是研究 观察 18S十28SrDNA的银染色方法，修 18S十28SrDNA的分布和转录活性的一种简 改的方案很多。重要的是应根据自己的实验材 易有效的方法。最近，银染色还开始用于着丝 料和条件，作些必要的试探。其中应注意：(1) 点、中心粒、减数分裂联会复合体 S（ynapsis 福尔马林的浓度可以为3-10%,,AgNO3的浓 complex）的研究，取得了许多有意义的新结 度可以为33.3-50外；(2)AS和福尔马林这一 果。 步反应和温度有关，温度愈高，反应愈快；(3) AS和福尔马林的比例不一定都是1:1，随不同 银 染 色 方 法 的实验材料，比例可以改变；(4）染色体标本的 一（）18S十28S核糖体基因的银染色 保存时间不拘，我们用过室温下保存达，年之 1.Ag-AS染色[u［ (1)溶液的配制： 久的片子。不过最好将片子贮放于冷暗处；(5) 50%0oAgN03的水溶液 W（/V);氨银液 A（S)(4 银溶液可使皮肤、衣服、显微镜染上色，操作时 克 AgN03溶于5毫升蒸馏水，加5毫升浓 应加小心。 NH40H);10％福尔马林 （10毫升福尔马林加 3.Ag十G带的染色[s1［ 要使Ag-NOR 2克无水醋酸钠，蒸馏水加至 100毫升，再以甲 在核型中精确地定位，在同一细胞中同时进行 酸调 PH二5-砂。 硝酸银和AS溶液盛于棕 G一带和银染色无疑是十分必要的。其步骤是： 色瓶中，冰箱中贮存。贮存时间以不超过一周 4滴Ag-1液 4（克AgN03＋8毫升蒸馏水）加 为宜。(2）在空气干燥法制成的染色体标本 于染色体标本上，覆以盖片，在68℃热板上放 上，滴加4滴AgNO3液，覆以狭长的盖玻片条 置3-5分钟，这时盖片周围出现白色硝酸银结 或（小片擦镜纸）。放在底部铺有湿0纸的培养 晶。水洗，干燥，再加两滴3%福尔马林 醋（酸 皿中，609C温育过夜。翌晨，水洗，干燥，加4 滴AS液和4滴10%的福;r;马林。加盖片。 ShtLiming:MethodofSilver-StainingandItsAppli- cationinCytogenetics 在显微镜下观察染色的情况。当染色体呈淡黄 1)本文照片系段幸生同志制备，赠送，特此致谢。 ．29 ． 钠中性化，并至少放3天后再使用）和两滴Ag- 2．加33.3%AgNO。水溶液几