硕士生物仪器分析之质谱31.ppt

直接进样法（静态法）：对纯的化合物来说，一般为气体或挥发性液体，可直接进样导离子源室，而不需要专用设备或器件，这类似于气相色谱中的样品进样。 动态平衡法（色谱进样）：对一些组分较复杂的混合物时，需将样品分离成一个个单一组分，再进入质谱仪。最典型的就是气相或液相色谱通过接口与质谱连接。 直接插入探针法：对于挥发性很小的固体样品，需将样品放在不锈钢杆或探针顶端的小杯内，将探针通过样品加入口放进离子源中，然后加热离子源直至固体挥发。 特殊样品的准备 对于蒸汽压低的样品，需进行衍生化后进样 (1) 电子电离源 (electron impact, EI) EI电离使用具有一定能量的电子直接作用于样品分子，使其电离。用钨或铼制作的灯丝在高真空中发射出电子。灯丝与电离盒之间的电压称为电离电压。对有机化合物通常选用70eV的电压。 原理：电晕放电，气体+溶剂=反应离子，被测物分子 在大气压下，化学电离反应的速率更大，电离效率应更高。 主要困难是将大气压力下产生的离子转移到处于高真空 （10-6Torr）状态的质量分析器中。 主要产生单电荷离子，适合分析相对分子质量较低（1000以下）的小分子、低极性至中等极性的化合物。 质谱仪器中凡有样品分子和离子的地方必须抽成真空状态，即质谱仪的离子源、质量分析器及检测系统都必须处于真空状态下工作（一般为1.333×10-4～1.333 ×10-6Pa ）。 质谱仪的真空系统要求残余气体中不能留有对测定不利的气体成分，要求本底小。 否则：— 空气中的氧会烧坏离子源的灯丝； — 会引起额外的离子－分子反应，使质谱复杂化， 且干扰离子源中电子束的正常调节，影响分辨率； — 真空度低会使本底增高，干扰质谱图。 常见术语: 质荷比: 离子质量(以相对原子量单位计)与它所带电荷(以电子电量为单位计)的比值，写作m/z 。 峰: 质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰。 离子丰度: 检测器检测到的离子信号强度。 基峰: 在质谱图中，指定质荷比范围内强度最大的离子峰称作基峰。 质量色谱图：指定某一质量(或质荷比)的离子其强度对时间所作的图。 总离子流图：在选定的质量范围内，所有离子强度的总和对时间或扫描次数所作的图，也称TIC图。 多电荷离子：指带有2个或更多电荷的离子，常见于蛋白质或多肽等离子。有机质谱中，单电荷离子是绝大多数，只有那些不容易碎裂的基团或分子结构（如共轭体系结构）才会形成多电荷离子，它的存在说明样品是较稳定的。 要使气相色谱和质谱仪器联用，首先要解决的问题是气压问题。色谱柱出口压通常是常压，而质谱仪在正常工作压力是高真空，故二者无法相接。必须采用一个连接器，用来除去载气，以降低气相色谱流出物的气压并富集试样，以达到质谱仪的工作要求。 如果色谱仪使用填充柱，必须经过一种接口装置——分子分离器，将色谱载气去除，使样品气进入质谱仪； 如果色谱仪使用毛细管柱，则可以将毛细管直接插入质谱仪离子源，因为毛细管载气流量比填充柱小很多，不会破会质谱仪真空。 在GC/MS分析中，常用的离子源有电子轰击离子源（EI），化学电离源（CI），EI/±CI复合源，场致电离源（FI），大气压化学电离源（APCI）等。 大多数高效液相色谱的组分是非挥发性的或无热分解性的，这使得由气相转化为液相的任务更具有挑战性，尤其是要保证组分的完整性。 最常用的三种连接方式是: LC-MS分析条件的选择 1. 电离源的选择 ESI和APCI在实际应用中表现出它们各自的优势和弱点。 ESI适合于中等极性到强极性的化合物分子，特别是那些在溶液中能预先形成离子的化合物和可以获得多个质子的大分子（蛋白质）。只要有相对强的极性，ESI对小分子的分析常常可以得到满意的结果。 APCI不适合多电荷的大分子分析，它的优势在于非极性或中等极性的小分子的分析。 2. 正负离子模式的选择 正离子模式适合于碱性样品，可用乙酸（pH＝3-4）或甲酸（pH＝2-3）对样品加以酸化。 负离子模式适合于酸性样品，可用氨水或三乙胺对样品进行碱化。 有些酸碱性并不明确的化合物，可优先选用APCI(+)进行测定。 3. 流动相的选择 常用的溶剂和缓冲液 水、乙腈及甲醇 (LC-MS理想的溶剂) 乙酸和甲酸 (可降低LC流动相的pH值以提高分离度) 氢氧化铵/氨溶液 (可提高LC流动相的pH值) 乙酸铵 (可改善色谱分离而不影响MS的性能, 最大浓度不超过0.1mol/L) 特 点 可分离10～100 kD分子量的蛋白质 高灵敏度和高分辨率 计算机辅助的图象分析技术（满天星） 与质谱分析匹配