第10章dna的生物合成11采用.ppt

第10章 第 一 节 复制的方式 ——半保留复制(semi-conservative replication) 双向复制(bidirectional replication) 半不连续复制(semi-discontinuous replication) 一、半保留复制是DNA复制的基本特征 DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 子链继承母链遗传信息的几种可能方式 （四）半保留复制的证明——实验 实验结果说明 子一代DNA双链中 一股是15N单链，从亲代接受和保留下来的； 另一股是14N单链，完全是新合成的。 Messelson和Stahl的实验支持半保留复制。 二、DNA复制从起始点向两个方向延伸形成双向复制 原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 复制起始点、复制子与复制叉（动画演示） DNA复制是模板依赖性的，必须要以亲代DNA链作为模板。 DNA分子的碱基埋在双螺旋内部，只有把DNA解成单链，它才能起模板作用。 亲代DNA的两股链解开后，可分别作为模板进行复制。 （二）底物（原料） 以四种脱氧核糖核酸(deoxynucleotide triphosphate)为底物，即dATP，dGTP，dCTP，dTTP。 引物酶(primerase)本质上是一种依赖DNA的RNA聚合酶（DDRP），该酶以DNA为模板，聚合一段RNA短链引物(primer)，以提供自由的3’-OH，使子代DNA链能够开始聚合。 引物酶需组装成引发体才能催化RNA引物的合成。 二、DNA聚合酶催化核苷酸之间聚合 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase) 简称：DNA-pol 活性（作用）有两方面： 5??3? 的聚合活性， 延5??3?方向延长脱氧核苷酸链。 核酸外切酶活性（两种情况） 3? ? 5?外切酶活性，能辨认错配的碱基对，并将其水解。 5? ? 3?外切酶活性，能切除突变的 DNA片段。 核酸外切酶活性 （一）核酸外切酶活性在复制中辨认切除错配碱基并加以校正 核酸外切酶(exonuclease)是指能从核酸链的末端把核苷酸依次水解出来的酶，外切酶是有方向性的。 （二）复制的保真性依赖DNA聚合酶正确的碱基选择 DNA聚合酶靠其大分子结构协调非共价（氢键）与共价（磷酸二酯键）键的有序形成。 嘌呤的化学结构能形成顺式和反式构型，与相应的嘧啶形成氢键配对，嘌呤应处于反式构型。 单链DNA结合蛋白（single strand binding protein, SSB），是一些能够与单链DNA结合的蛋白质因子。 SSB的生理作用： ①使解开双螺旋后的DNA单链能够稳定存在，即稳定单链DNA，便于其作为模板复制子代DNA； ②保护单链DNA，避免核酸酶的降解。 引物酶(primerase)本质上是一种依赖DNA的RNA聚合酶（DDRP），由dnaG基因编码，该酶以DNA为模板，聚合一段RNA短链引物(primer)，以提供自由的3’-OH，使子代DNA链能够开始聚合。 （注：DNA聚合酶没有催化游离dNTP之间相互聚合的能力） 引物酶需组装成引发体才能催化RNA引物的合成。 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 复制起始点比大肠杆菌起始点OriC短（11bp） 复制的起始需要DNA-pol α（引物酶活性）和pol δ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）在复制起始和延长中起关键作用。PCNA为同源三聚体，具有与E.coli DNA 聚合酶Ⅲ的β亚基相同的功能和相似的构象，即形成闭合环形的可滑动DNA夹子，在RFC的作用下PCNA结合于引物－模板链；并且PCNA使polδ获得持续合成能力。PCNA水平也是检验细胞增殖的重要指标