第10章甾体激素类药物的分析22013.ppt

测定方法——对照品法 ChP TTC（RT） BP TTC（RT） USP BT 40～45′ 暗 实例：醋酸地塞米松磷酸钠含量测定 ChP方法 供试液：精密量取本品5 mL （约醋酸地塞米松25 mg），置100mL量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀。滤过，取续滤液为供试品溶液。 对照液：精密称取醋酸地塞米松磷酸钠标准品25 mg，置100mL量瓶中，加无水乙醇振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀。 测定法：精密量取上述溶液各1 mL，分别置干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9 mL与氯化三苯四氮唑试液1 mL，摇匀，再各精密加氢氧化四甲基铵试液1 mL，摇匀，在25℃暗处放置40～50分钟，照分光光度法，在485 nm的波长处分别测定吸收度，计算。操作应避光。 水分影响反应速度 制造强碱性环境 反应过程、反应产物怕光 讨论——各种因素的影响 1.基团的影响： C11= O＞ C11－OH C21－OH＞ C21-酯 C16无论何种取代基ν↓ 2. 溶剂、水分的影响 含水量＞5%→ν↓ 含水10%→A↓10% 含水30%→几无反应 — 无水乙醇 醛 → A↑— 无醛无水乙醇 3.碱的种类和加入顺序的影响： 反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行 以氢氧化四甲基铵的结果最佳. 皮质激素和氢氧化四甲基铵长时间（24h）接触后，部分分解. 加入顺序： 4. O2与光线的影响 反应过程 反应产物 怕光 →避光、快速 O2影响颜色强度和稳定性 →隔绝空气、 快速、充N2 5. 温度与时间 t℃↑→ν↑ 但t℃↑ →甲 分解↑→%↓ 一般以室温或30℃恒温条件下显色，易得重现性较好的结果。 ChP 25℃ 40～45′ BP 30℃ 1h 特点： 缺点 影响因素太多，操作不易掌握。 优点 专属性很好。 意义：测定结果能指示药品的稳定性（氧化及降解产物无此反应） 广泛应用于皮质激素的稳定性研究。 ★异烟肼比色法 [反应式]： 具有两个酮基的甾体激素黄体酮、氢化可的松可形成双腙。 [方法]： 对照品法： 暗45′ 实例： ChP： 倍他米松 倍他米松磷酸钠 倍他米松 讨论 1.溶剂选择：无水乙醇和无水甲醇好，其他溶剂受异烟肼盐酸盐溶解度影响不宜采用。 甲醇稳定性较好，呈色强度较高。但对植物油溶解度小。一般采用无水乙醇作为整个反应的介质。（倍他米松、倍他米松磷酸钠等） 2.酸的种类和浓度以及异烟肼的浓度： 酸与异烟肼试剂的摩尔比为2:1时可获得最大吸收度。 酸度↑→异烟肼盐↓ 酸度↓→ A↓ 试液配制: 取异烟肼75mg，加盐酸0.1m1．加甲醇使溶解成100ml。 盐酸：0.0074mol/L （硫酸：0.0037mol/L 醋酸：4.4mol/L） 异烟肼：0.00365mol/L 3.水分、O2与光线的影响 (1)水分增高吸收度降低，缩合物水解； 可逆反应: 含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓ 故仪器及试剂应尽量避免水分 (2)温度升高，反应加速。 (3)在不挥发溶剂、不吸收水分时，光与氧不影响反应。（具塞容器） 4.反应的专属性： 反应速度 C3 = O ＞ C17= O 、 C20= O C11= O 不反应 室温不到1h即可定量地与酸性异烟肼反应 长时间放置或加热后方可反应完全 本法对Δ4-3-酮基甾体具有一定的专属性。 KOBER反应比色法 [定义]：指雌激素与硫酸-乙醇共热呈色，用水或稀硫酸稀释后重新加热发生颜色改变，并在515nm附近有最大吸收。 原理：（两步反应） λmax=465 λmax=515 △ △ 实线——第一步反应虚线……第二步反应 可能原理（了解） 通过去羟基、重排及甲基由C13移到C17；然后被硫酸氧化形成具有较长共轭双键发色团的产物 又进一步生成具有吸收光谱红移发色团的产物。 λmax=515nm 实例 ChP 复方炔诺酮滴丸中炔雌醇片的含量测定方法 教材402页 缺点：1.第二步反应难以彻底进行，会出现双色。 2. 辅料，赋形剂干扰测定 改进 铁酚试剂法 五、体内甾体激素类药物分析（了解） 四、非水滴定——米非司酮 Doping control 滥用药物检测 刺激剂 麻醉剂 β-阻断剂 利尿剂 遮蔽剂 合成类固醇及β2激动剂 肽类激素 外源性 内源性 1、甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生显色反应的基团 A. 酚羟基 B. 活泼次甲基 C. 甲酮基 D. C17 -α