感染T细胞斑点试验在耐多药肺结核诊断中应用价值.docVIP

感染T细胞斑点试验在耐多药肺结核诊断中的应用价值 　　[摘要] 目的 分析探讨感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）在耐多药肺结核诊断中的应用价值。 方法 选择2014年1月～2016年1月我院收治的耐多药肺结核患者71例，另选择35例同期健康体检者作为对照组，比较各种检测方法诊断的阳性率，并采用敏感性、特异性、准确度作为诊断试验的评价指标。 结果 T-SPOT.TB检测诊断耐多药肺结核阳性率最高，达95.8%，显著高于其他各项检测方法，差异具有统计学意义（P 　　[Key words] Multi-drug resistant tuberculosis； T-SPOT.TB test； Sensitivity； Specificity 结核病是一种慢性传染病，是由结核分枝杆菌感染引起的疾病，其中最为常见的是肺部结核。近年来全球结核病疫情呈回升状态，耐药结核菌发生率不断增加[1，2]。其中，耐多药肺结核指结核菌至少同时对利福平、异烟肼两种抗结核药物耐药，发病率较高，约占全世界25.0%，还存在持续向外播散耐多药结核菌情况。耐多药肺结核治疗难度大，治疗周期长，治愈率低，因此，寻找特异的检测方法，快速且准确诊断是结核病控制的关键问题，且对于监测结核病的发展、转归及临床治疗具有重要意义。结核菌素试验（purified protein derivative tuberculin，PPD）为诊断结核病的主要方法，但假阳性率较高。结核感染T细胞斑点试验（TB infection of T cells spot test，T-SPOT.TB）为一种新型的诊断方法，敏感性和特异性水平较高。本研究选取耐多药肺结核病例行T-SPOT.TB试验，现报道如下 1 资料与方法 1.1 一般资料 选择2014年1月～2016年1月我院收治的耐多药肺结核患者71例，入选研究对象均知情同意，均排除合并严重心、脑、肝、肾、消化系统等疾病者。其中男38例，女33例；年龄22～67岁，平均（41.2±6.2）岁；病史0.5～3年，平均（14.1±3.2）个月。疾病类型：原发性肺结核15例，继发性肺结核40例，血型播散型肺结核16例。另选择35例同期健康体检者作为对照组，其中男18例，女17例；年龄20～58岁，平均（42.3±5.4）岁。两组的性别、年龄等比较差异无统计学意义（P0.05），具有可比性 1.2 检测方法 1.2.1 T-SPOT.TB试验 取枸橼酸钠抗凝的静脉血5 mL，分离外周血单核细胞（PBMC）放在包被IFN-7抗体的微孔板，加入结核分枝杆菌特异性抗原早期分泌靶向抗原（ESAT-6）和培养基滤过蛋白（CFP-10）作为抗原，37℃温箱培养24 h后，洗去抗原致敏效应T淋巴细胞，加入生物素标记的二抗，再经酶联显色，在细胞因子分泌的地方形成斑点，通过记录斑点数检测结核分枝杆菌特异抗原致敏的效应T淋巴细胞数量 1.2.2 结果判断 当空白对照孔内斑点数6，任一实验孔斑点数大于空白孔斑点数的2倍，结果也表示阳性[3] 1.2.3 其他检查方法 （1）PPD试验：采用Mantoux法，取PPD 0.1 mL（含5单位结核菌素）行前臂尺侧皮内试验，48～72 h后观察结果。硬结直径≥10 mm为TST阳性结果[4]。（2）血清结核抗体检测：采用酶标仪读取光密度值（OD值），并在标准滴度曲线表中查找出相应标本中抗结核抗体滴度，阳性为400 U/mL[5]。试剂盒为南京大渊代理的蛋白芯片试剂盒，严格按照说明书进行操作。（3）结核PCR：结核DNA检测。（4）抗酸杆菌涂片。（5）结核分枝杆菌培养 1.3 评价指标 采用敏感性、特异性、准确度作为诊断试验的评价指标。①敏感性=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100%；②特异性=真阴性例数/（真阴性例数+假阳性例数）×100%；③准确度=（真阳性+真阴性）/（真阳性+真阴性+假阳性+假阴性）×100% 1.4 统计学处理 采用SPSS20.0统计学软件进行处理和分析，其中计数资料采用χ2检验，P 　　结核抗体检测试验敏感性较差，对潜伏性肺结核的筛查意义不大，价格昂贵。结核感染T细胞斑点试验技术通过计算斑点的数量推测出患者体内结核杆菌产生反应的效应T细胞是否存在。T.SPOT实验结合酶联免疫斑点技术（即ELISPOT技术）与γ-干扰素释放试验，通过检测受结核分枝杆菌抗原刺激而活化的效应T细胞来诊断结核感染。结核感染后体内长期存在抗原特异性T细胞，当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放γ-干扰素。实验中利用ESAT-6和CFP-10两种结核特异性抗原刺激外周血中结核特异性T淋巴细胞分泌γ-干扰素，并通过ELISPOT方法检测γ-干扰素的释放水