从辣椒中提取分离辣椒红色素.docVIP

应用化学专业实验 从辣椒中提取分离辣椒红色素蔡芳雅 从辣椒中提取分离辣椒红色素一、目的通过了解分离活性有机化合物的过程和基本操作掌握薄层色谱板、色谱柱的制作及用以分离技术二、实验原理辣椒是茄科植物辣椒的果实辣椒果实所含辛辣成分为辣椒碱类物质包括:辣椒碱二氢辣椒碱降二氢辣椒碱高辣椒碱高二氢辣椒碱高二氢辣椒碱壬酞香荚兰胺辛酞香英兰胺癸酞香英兰胺。辣椒红色素包括隐黄素辣椒红素辣椒玉红素胡萝卜素还含维生素C柠檬酸酒石酸苹果酸蛋白质矿物质等。辣椒红色素是一种存在于成熟红辣椒果实中的四萜类橙红色色素。其中极性较大的红色组分主要是辣椒红素和辣椒玉红素占总量的5060%，另一类是极性较小的黄色组分主要成分是β-胡萝卜素和玉米黄质。红辣椒含有多种色泽鲜艳的天然色素其中呈深红色素主要是由辣椒红脂肪酸酯和少量辣椒玉红素脂肪酸酯所组成呈黄色的色素则是胡萝卜素。辣椒红色素不仅色泽鲜艳热稳定性好而且耐光、耐热、耐酸碱、耐氧化无毒副作用是高品质的天然色素广泛用于食品、化妆品、保健药品等行业。国内外辣椒红素的生产方法主要有油溶法、超临界萃取法和有机溶剂法三种。本实验是以二氯甲烷为萃取溶剂从红辣椒中只萃取出色素经浓缩后用薄层层析法作初步分析或用柱层析法分离出红色素用红外光谱鉴定并测定其紫外吸收。辣椒红色素三、实验试剂与器材实验材料干燥红辣椒辣椒尽量研细提高提取效率试剂二氯甲烷、硅胶G200300目、沸石、石油醚、二氯甲烷。标准品辣椒红的脂肪酸酯、辣椒玉红素和β-胡萝卜素仪器100mL圆底烧瓶、球形冷凝管、布氏漏斗、漏斗、吸滤瓶、广口瓶、色谱柱、锥形瓶、7玻璃棒、200mL烧杯、100mL烧杯、50mL烧杯、毛细管、滴管、滤纸、硅胶薄层板、量筒、层析缸、恒温水浴锅、循环水多用真空泵紫外光谱仪、红外光谱仪等。四、实验步骤1. 色素的萃取和浓缩 注意蒸发操作应在通风橱中进行或水浴加热回收二氯甲烷安装冷凝装置在7080℃水浴中蒸馏浓缩回收溶剂。当瓶内剩余少量液体时停止加热将蒸馏残液转入表面皿与沸水浴上蒸发近干最后得到红色物质即为色素的混合物。 3. 柱层析分离选用内径1cm长约15-20cm的层析柱检查柱旋塞是完好有无渗漏现象用硅胶20g再将ml左右的二氯甲烷与20g硅胶调成糊状如不能调成糊状可以多加二氯甲烷硅胶和二氯甲烷用量可以根据柱的大小灵活调整硅胶柱的高度达到便于加样和操作就可以通过大口径固体漏斗加入到柱中边加边轻轻敲击层析柱使吸附剂装填致密并保持层析柱中的固定相不干其二氯甲烷液面高出砂层2cm即可。再打开活塞待二氯甲烷溶液液面与硅胶上层的砂层平齐时柱装好后用滴管汲取混合色素的浓缩液或蒸干的色素液用0.5-1ml二氯甲烷溶解用一根较长的滴管将混合色素液加入柱顶再打开旋塞待色素溶液液面与硅胶上层的砂层平齐时用一根较长的滴管缓缓注入少量洗脱剂二氯甲烷然后小心冲洗内壁后用二氯甲烷混合液淋洗观测记录色素的分离情况并用不同的接收瓶分别接收先流出柱子的色带。当色带完全流出后停止淋洗。将相同颜色组分的接收液合并。回收溶剂蒸发操作应在通风橱中进行或水浴加热回收二氯甲烷安装冷凝装置在7080℃水浴中蒸馏浓缩回收溶剂也可以用旋转蒸发仪蒸发浓缩收集色素。五、注意事项1. 本展开剂一般能获得良好的分离效果。如果样点分不开或严重拖尾可酌减点样量或稍增二氯甲烷比例。2. 不可用同一支毛细管汲取不同的样液。3. 回流速度不可过快以防浸泡提取不充分4. 尽量将溶剂蒸干5. 回收溶剂的温度不宜过高以防止溶剂爆沸。六、二氯甲烷与硅胶调成糊状为了保持柱子的均一性，使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中是必要的，否则当柱中溶剂或溶干时，就会使柱身干裂，影响渗透和显色的均一性。 洗脱流速不宜过快，避免因此压紧凝胶，色素分离不开；也不要过慢，使柱装得太松，导致层析过程中，凝胶床高度下降，色素洗脱很慢。因此应控制洗脱流速辣椒玉红素β-胡萝卜素红：Rf=3.59/7.33=0.490黄：Rf=6.29/7.33=0.858 七、思考题1. 层析柱中有气泡会对分离带来什么影响如何除去气泡层析过程中有时会出现“拖尾”现象一般由什么原因造成的对层析结果有何影响如何回避“拖尾”现象 答：“拖尾”现象造成的原因：（1)点样过量在薄层色谱过程中化合物在薄层板上进行吸附———解吸附的移动过程中，任何一类吸附剂，它们的负载化合物的能力是有一定限度的，因点样过量而超载后，过剩的化合物被抛在后面，形成拖尾现象。 重复点样样点虽在同一垂直线而样点圆心未重合，致使样点呈近椭圆形，也是形成拖尾现象的又一原因结果使斑点间界限模糊，结果难以判断。 为避免以上异常现象，应选择合适的点样量和复点样过程中，样点圆心应重合。 3. 如果样品不带色如何确定斑点的位置举12个例子说明。 4. 把收集的不同色素组分继续进行