全基因组扩增技术研究进展.PDFVIP

维普资讯 国外医学遗传学分册 2002年 第 25卷 第 4期 ·189 · 全基 因组扩增技术 的研 究进展 金 帆 袁淑 慧 黄荷风 综述 (浙江大学医学院附属妇产科 医院 ．浙江 杭州 310006) 摘要 ：全基 因组扩增可增加微量 DNA分析的遗传信息量 ，为实现微量 DNA 多基 因位点分析和重复检测提供 了可能．目 前 已应用于植入前遗传学诊断、母体外周血胎儿细胞产前遗传学分析．及肿瘤基因分析等领域研究 ．是一项非常有价值的技 术 。 关键词 ：全基 因组扩增 ；植入前遗传学诊 断 ；多基 因多位，最 中图分类号 ：Q78l 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001—1048(2002)04—0189～04 植入前 遗传学 诊 断 (preimplantationgenetic 基 因以及 全基 因组 DNA 组成 的研 究 。因此 ．WGA diagnosis．PGD) j、母 体血 胎 儿 细 胞 遗传 学 分 是一项非常有价值 的技术 ，本文对其作一简述 。 析 、组织 显微切 割分 子生 物学 分析 ]、法 医学 和 1 WGA 技术简介和应 用 古生物学研究 等都会面对一个共 同J司题 ：极有限 甚至单拷贝的基 因组 DNA．与满足多种遗传学分 WGA 技术发展至今 主要 的有连接一适应子 析要求 的矛盾 。 PCR(1inker—adaptor—PCR)、AluPCR、标 记 随机 引 聚 合 酶 链 反 应 (polymerasechainreaction， 物 PCR(taggedrandom primerPCR．T—PCR)、扩 PCR)具有极高 的 DNA检测敏感性 ，多重 PCR 或 增前 引物延伸 (primerextensionpreamplification， 荧光 多重 PCR 已成 功应用 于极微量和单拷 贝的 PEP)和 简 并 寡 核 苷 酸 引 物 PCR (degenerate DNA 的多位 点分析 ]。但多重 PCR存在系统条件 oligonuclcotideprimer—PCR ，D()P—PCR )。 优化 困难 ．多对 引物延伸时相互影 响 ，产物分析 时 1．1 连接一 适应 子一PCR 信号相互干扰等 困难 ，使其实际诊断位 点数受限。 整 个 基 因组 DNA 经 限制性 内切酶 (MboJ、 多色荧光 原位杂交 (muhicolourfluorescence MseI等)作用产生数百个碱基大小 的 DNA 片段 ． in—situhybridization，M—FISH)运 用 不 同 比例 的荧 klenow修饰两末端后 ．各连接互补 的特异性 的 2o 光素组合 ，可实现对 多条染色体 的同步分析 ，但 由 个碱基对 DNA 片段 ．并 以此 作为 PCR反应起始模 于具 可分辨光谱 的荧光染 料种类 有限 ，目前 多限于 板 ，连接子序列 同时作为引物参加扩增 。有人认为 五色 FISH。而多轮 FISH 因多次洗脱过程 ．常导致 两侧连接子序列完全互补易形成 自身互补 ，会影 响 细胞核丢失 ，较常用仅 为二轮 FISH ]。 “光谱 核 PCR效率 ，因此在一侧 的连接子序列的 3端删除 3 型”(spectrum karyotyping)Ig分析 的前提条件是受 个碱基对 ，同时 以长连接子序 列为 引物进 行 PCR 检组织细胞 的染 色体标本制备 ，应用于植入前胚