庆大霉素人工抗原和多克隆抗体的制备和鉴定.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2014, Vol.30, No.6 庆大霉素人工抗原及多克隆抗体的制备与鉴定 1 1 2 1 1 1 1 1 许耀心 ，龚云飞 ，陈宗伦 ，奚茜 ，戴明雁 ，吴莹莹 ，刘啊敏 ，张明洲 （1.中国计量学院生命科学学院，浙江省生物计量与检验检疫重点实验室，浙江杭州 310018) (2.杭州迪恩科技有限公司，浙江杭州 310013） 摘要：为研究建立庆大霉素的免疫分析技术，合成庆大霉素人工抗原：采用碳二亚胺法将庆大霉素（gentamicin，GM ）偶联到 牛血清白蛋白（BSA ）和鸡卵清蛋白（OVA ）上，分别合成免疫原GM-BSA 和包被原GM-OVA 。通过紫外扫描和SDS垂直电 泳鉴定证明人工抗原偶联成功。以GM -BSA 为免疫原，采用新的动物免疫方案免疫新西兰大白兔，获得抗庆大霉素抗血清。在本次 免疫新方案中，在动物的生命周期内获得了多于普通免疫的血清量，在多抗血清的制备上是一次抗体工程上的尝试。通过间接酶联免 疫对抗血清效价和灵敏度进行跟踪检测，结果表明抗血清效价在九免后稳定在 1:20000 左右，IC50 则稳定在3 ng/mL 左右。并在八免 血清基础上建立了GM 间接竞争ELISA 法。结果表明，庆大霉素浓度在0.3~243 ng/mL，方法的线性回归方程为y=-0.1009lnx+0.6093 2 和R =0.9845，方法的检测灵敏度IC =2.954 ng/mL，最低检测限IC =0.056 ng/mL 。该研究结果为多抗血清制备在量上的突破提供了 50 10 思路，同时为研制庆大霉素试剂盒提供了良好的基础。 关键词：庆大霉素；人工抗原；碳二亚胺法；多克隆抗体 文章篇号：1673-9078(2014)6-152-157 Preparation and Identification of Gentamicin and Its Polyclonal Antibody 1 1 2 1 1 1 1 XU Yao-xin , GONGYun-fei , CHEN Zong-lun , XI Xi , DAI Ming-yan , WU Ying-ying , LIU A-ming , ZHANG Ming-zhou1 (1.Colleage of Life Science , China JiLiang University, Zhejiang Provincial Key Laboratory of Bio-metrology, Inspection and Quarantine, Hangzhou 310018, China) (2.Hangzhou DNA Sci-tech Co., Ltd, Hangzhou 310013, China) Abstract: To develop immunoassay for gentamicin, the artificial antigen and polyclonal antibody were prepared in this study. Identified through ultraviolet spectrum (UV) and SDS-PAG, the immunogen (GM-BSA) and coating antigen (gm-ova) of gentamicin were synthesized by the method of carbodiimide successfully. GM