随机引物PCR技术及其在动物医学中应用的研究进展.pdfVIP

·62· 生物技术 中国畜牧兽医 2014年第41卷第10期 随机引物PCR技术及其在动物医学中应用 的研究进展 沈学怀，张丹俊，潘孝成，赵瑞宏，胡小苗，戴银，侯红艳，周学利，朱传民 (安徽省农业科学院畜牧兽医研究所，安徽合肥230031) 引物扩增基因组DNA片段，在无需预知研究对象的情况下对其进行基因特征的分析，具有简便、高效、实用等优点，现已广泛应 用于分子生物学的多个领域。文章主要对AP-PCR技术的原理、优缺点、研究近况及其在动物医学中的应用等作一综述。 关键词：随机引物PCR；研究进展；动物医学；应用 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1671—7236(2014)10—0062—06 PCR， 随机引物PCR技术(arbitrarilyprimed 完全的匹配，在较低的退火温度下，只要引物的一部 am— AP—PCR)又称随机扩增多态性DNA(random分特别是37端有3～4个以上碱基与模板(DNA或 plifiedpolymorphicDNA，RAPD)，是分别由Wil一 liams和welsh几乎同时建立起来的一项DNA多 DNA聚合酶的作用下 在一定长度范围内，在Taq 态检测技术(Williams等，1990；Welsh等，1991)。就可扩增出一定长度的DNA片段，利用多个随机 AP—PCR技术是以PCR为基础，在不需要预先了解 引物可使检测区域扩大至整个基因组(Babu等， 基因序列的情况下运用随机的寡聚核苷酸链为引物 2014)。扩增后的产物经琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶 进行PCR反应，从而快速有效的对目的基因进行扫 电泳分离，核酸染料或放射性自显影得到DNA指 测，该技术具有快速灵敏、程序简便等优点，在短时 纹图谱，从而分析比较其多态性或进一步克隆分析 间内就被应用到包括物种鉴定(Salem等，2005)、动 (Babu等，2014)。 植物分类(Sherif，2013；Mustafa等，2012)、基因多 2 AP-PCR的技术方法和优缺点 态性调查(Adzitey等，2012)、遗传性突变基因的筛2．1 模板DNA提取和质量检测模板DNA提取 查(Asaad等，2013；Vedrana等，2013)、未知病毒发 的方法有很多，应根据组织的不同和试验需要确定， 现(Su等，2011)等方面。文章就AP-PCR技术的原 但其基本的原理相同，都是通过酶或有机试剂裂解 理、优缺点、最新的研究进展及其在动物医学方面的 组织使核酸游离出来，然后通过有机溶剂或吸附柱 应用等作一综述。 纯化后提取。核酸的浓度和质量可通过UV分光 1 AP-PCR的基本原理 光度计读取D：。。。。与D。。。。的比值和1％琼脂糖凝 AP—PCR基本原理与常规PCR类似，均为引物 指导下的DNA扩增，同样包括变性、退火、延伸的 很多商品化的核酸提取试剂盒可供选择，使用方便 基本步骤，其不同之处在于普通PCR使用的是序列 并可得到较高质量的模板(DNA或cDNA)。 特异性引物而AP-PCR过程中的引物是10个左右 2．2随机引物的选择随机引物长度通常为10个 非特异性寡聚核苷酸链(随机引物)。AP—PCR之所