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核分离技术
染色质免疫沉淀技术（ChIP）实验方法
实验原理
染色质免疫沉淀技术（ChIP）通过与染色质片段共沉淀和PCR技术，在体内检测与特异蛋白质结合的DNA片段。ChIP技术最大的优点就是在活体细胞状态下研究了蛋白质和目的基因结合状况，减少了体外实验的误差。在活体细胞中，先对与调节蛋白结合的染色质进行分离，然后通过一定的方法（例如：超声波）随机剪切染色质，用调节蛋白的抗体沉淀目的染色质，再通过一定手段把目的染色质上的蛋白质去除掉，最后用PCR等方法检测鉴定共沉淀的DNA片段的特性。
仪器和试剂
真空设备、涡旋器、液氮、冷冻离心管、离心机、超声波粉碎仪、miracloth
提取缓冲液1（EB1）:0.4M蔗糖；10mM Tris-HCl，pH8.0；5mM β-ME；0.1mM PMSF；蛋白酶抑制剂混合物（aprotinin、pepstain A、Leupeptin、Antipain、TPCK、Benzamidine）
提取缓冲液2（EB2）:0.25M 蔗糖；10mM Tris-HCl，pH8.0；10mM MgCl2；1%Triton X-100；5mM β-ME；0.1mM PMSF；蛋白酶抑制剂混合物（同上）
提取缓冲液3（EB3）：1.7M蔗糖；10mM Tris-HCl，pH8.0；0.15%Triton X-100；2mM MgCl2；5mM β-ME；0.1mM PMSF；蛋白酶抑制剂混合物（同上）
核裂解缓冲液（NLB）：50mM Tris-HCl，pH8.0；10mM EDTA；1%SDS；PMSF和蛋白酶抑制剂混合物（同上）
实验方法
植物材料的准备（以拟南芥为例）
．液氮预冷研钵和杵子，液氮研磨幼苗成粉末状。
．在50ml管中加入30ml EB1悬浮组织。(此时，EB1中不含甲醛)
．4层miracloth过滤组织到一个新的50ml管中。
．4℃，2880g离心20min。
．小心去上清，1ml EB2重悬沉淀。
．转移至一个新的1.5ml离心管。
．4℃，12000g离心10min。．300ul EB3重悬沉淀。
．转入另一已加入300ul EB3新管中。
1．4℃，16000g离心1小时。
1．去上清，300ul NLB重悬沉淀（4℃操作），涡旋，用枪头吹打12．超声波处理溶液．4℃，16000g离心5min沉淀碎片。
．转移上清到一个新管
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