无病毒苗的培育.ppt

无病毒苗的培育;一、病毒在植物上的危害;; 为了提高作物的产量和质量，根除病毒和其它病原菌是非常必要的。 但现在还没有什么药物可治愈受病毒侵染的植物。若一个无性系的整个群体都已受到侵染，获得无病毒植株的唯一方法就是消除营养体的病原菌，并由这些组织中再生出完整的植株。一旦获得了一个不带病原菌的植株，就可在不致受到重新侵染的条件下，对它进行营养繁殖。用组织培养法消除病毒是唯一行之有效的方法。;二、无病毒苗培育的意义 采用生物、物理、化学等途径防治病毒病收效甚微，甚至毫无成效。自从50年代发现通过组织培养的方法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类，提高产量、质量后（如草莓可增产20～50％，植株结果多，单果重增加，上等果比例提高。菊花切花品种的脱毒株，表现出株高增加，切花数增多，花朵大，切花较重）。因此到60至70年代组织培养的技术在花卉、蔬菜和果树等得到广泛的应用。 ;一、茎尖培养脱毒 感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点（约0.1～1.0mm区域）则几乎不含或含病毒很少。这是因为分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。在切取茎尖时越小越好，但太小则不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。 茎尖培养脱毒，由于其脱毒效果好，后代稳定，所以是目前培育无病毒苗的最广泛最重要的一个途径。;Life Science Plant Tissue Culture ; 植物激素的种类与浓度对茎尖生长和发育具有重要的作用。在双子叶植物植物激素大概是在第2对最年幼的叶原基中合成，所以茎尖的圆锥组织生长激素不能自给，必须提高适当浓度的生长素(0.1～0.5mg/L)与细胞分裂素，在生长素中应避免使用易促进愈伤组织化的2,4－D，宜换用稳定性较好的NAA或IBA，细胞分裂素可用KT或BA。GA3对某些植物茎尖培养是有用的。有时茎尖培养添加活性炭。 ; 茎尖培养中，由于操作方便，一般都使用琼脂培养基。不过，在琼脂培养基能诱导外植体愈伤组织化的情况下，最好还是用液体培养基。在进行液体培养时，须制作一个滤纸桥，把桥的两臂浸入试管内的培养基中，桥面悬于培养基上，外植体放在桥面上。 ;Life Science Plant Tissue Culture ; 一般来说，茎尖分生组织由和其它器官的培养一样，在进行茎尖培养时，首要一步是获得表面不带病原菌的外植体。一般来说，茎尖分生组织由于有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细解剖，无须表面消毒就应当能得到无菌的外植体。有时消毒处理仅会增加培养物的污染率。选取茎尖前，可把供试植株种在无菌的盆土中，放在温室中进行栽培。浇水时要直接浇在土壤中而不要浇在叶片上。另外，最好还要给植株定期喷施内吸杀菌剂，可用多菌灵(0.1%)和抗生素（如0.1%链霉素）。对于某些田间种植的材料，可以切取插条插入Knop溶液中令其长大，由这些插条的腋芽长成的枝条，要比由田间植株上直接取来的枝条污染小得多。 ; 于有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细解剖，无须表面消毒就应当能得到无菌的外植体。有时消毒处理仅会增加培养物的污染率。选取茎尖前，可把供试植株种在无菌的盆土中，放在温室中进行栽培。浇水时要直接浇在土壤中而不要浇在叶片上。另外，最好还要给植株定期喷施内吸杀菌剂，可用多菌灵(0.1%)和抗生素（如0.1%链霉素）。对于某些田间种植的材料，可以切取插条插入Knop溶液中令其长大，由这些插条的腋芽长成的枝条，要比由田间植株上直接取来的枝条污染小得多。 ;Life Science Plant Tissue Culture ; 在剖取茎尖时，把茎芽置于解剖镜下，一手用细镊子将其按住，另一手用解剖针将叶片和叶原基剥掉，解剖针要常常蘸入90%酒精，并用火焰灼烧以进行消毒。但要注意解剖针的冷却，可蘸入无菌水进行冷却。当一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后，用解剖刀片将分生组织切下来，为了提高成活率，可带1～2枚幼叶，然后将其接到培养基上。接种时确保微茎尖不与其他物体接触，只用解剖针接种即可。 将接处好的茎尖置于22℃左右的温度。每天16小时2000～3000Lx的光照条件下培养。由于在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠；所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。微茎尖需数月培养才能成功。;Life Science Plant Tissue Culture ;Life Science Plant Tissue Culture