兔精液液态冷藏研究.pdfVIP

150 华东地区第十届实验动物科学学术交流会 免精液液态冷藏研究 杨博L2，高娟”，贾青-，一，刘丽均1，郁丽丽1，靳亚平2，施恩1 (1．中国科学院上海实验动物中心，上海201615；2．西北农林科技大学动物医学院，杨凌712100； 3．南京农业大学动物医学院，南京210095) 【摘要】 目的探讨兔精液在412条件下的液态冷藏保存方法。方法将采集的新鲜兔精液分成 三份，一份不稀释，另外两份用I、Ⅱ稀释液分别进行稀释，在412条件下保存，每隔12h取部 分精液在37℃平衡5min，进行活力检测，比较分析各组精子存活率的差异性。结果72h后， 兔精液原液中的精子存活率为58．2％，显著高于稀释组。结论将精液原液通过陵速降温保存在 412条件下。可以有效延长兔精子在离体状态下的存活时间，可以用来进行兔精液的液态保存。 [关键词]兔精液；液态；冷藏 人工授精在兔等动物的生产中被广泛应用。用简单的方法和储存条件进行兔精液的液态保存，延长 精子的存活时间，可以使人工授精更加灵活。本实验用不同的稀释液对精液进行稀释，在4C条件下保 存兔精液，观察不同实验组的精子活力随时间的变化，以期探讨简单有效的兔精液液态保存方法，为兔 的人工授精技术发展提供参考。 1材料与方法 1．1实验动物 SPF级18月龄新西兰雄兔和8月龄新西兰雌兔，均为上海斯莱克实验动物有限责任公司提供[SCXK (沪)2007．0005】。实验兔单笼饲养，每天光照12h(8：00～20：00)，定量喂食全价饲料，自由饮水。 1．2实验器材 倒置显微镜(521665，LeicaMicrosystems 有限公司)；血球计数板(xb．k．25，上海医乐医用光学仪器厂)。 1．3稀释液 000 稀释液I组分：3．03％Tris、1．68％柠檬酸、1．25％葡萄糖、1IU／ml青霉素和链霉素l mg／ml； 檬酸钠、0．2％柠檬酸、0．3％BSA、0．05％庆大霉素。 1．4实验方法 实验前用假阴道法采集精液，放在保温瓶(37℃)中带回实验室，经镜检精子活力大于8，精液无明 显杂质和污染的用于实验。分成三份，移入三个试管内，分别加入等量的稀释液，轻摇混匀，用封口 膜封口。将试管放入含有约150 h ml温水(3712)的250ml烧杯中水浴，共同置于412冰箱保存【2】。每隔12 取部分精液，甩HTF稀释，37C培养箱中放置5rain后用血球计数板在显微镜下检测精子活力。实验重 复4次取平均数。 精子活力=直线前游精子数／统计的精子总数×10； 精子活率=冷藏后检测活力／保存前活力×100％。 2结果 2．1不同稀释处理对兔精液冷藏保存的影响 非稀释(原液)组在4。C条件下保存48h，精液性状变化不明显，72h后的活率为58．2％，精子发生 华东地区第十届实验动物科学学术交流会 151 轻微的聚团现象。而稀释液I组和稀释液II组在保存12 h后，精子活率均低于50％(图1)，并且精子有 明显的聚团现象。保存24h后，有较多的死精子沉积在试管底部，上层精液的浑浊度明显降低：36h 后精液中仅有个别精子游动。 三100．O％ 帕 n)80．096 雏6㈣ 搴磊40．o％ 中o ∞ 益A1 皇20．0％ QOL圣磊 善 ∽fm————一——～一一』斗_冉％ ’0．0％ 0．O％ O．0 O}l 】卅l 24tl 0h}l ，18h