清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤TLR3及TRAM mRNA表达的影响.pdfVIP

清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤TLR3 及 TRAM 表达的影响 中 文 摘 要 目的：观察清热化瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤 Toll 样 受体3(TLR3) 、TRIF 相关受体衔接分子(TRAM) 的影响，探讨清热化 瘀Ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤神经元保护的作用机制。 方法：将成年健康SD 大鼠192 只，按随机数字表随机分为两 大组。每组96 只随机分为4 个亚组：空白组(A 组) 、假手术组(B 组)、 脑缺血再灌注组(C 组) 、清热化瘀Ⅱ号方组(D 组) 。采用二次线栓法 制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。各组分别作以下处理：A 组自由 饮食；正常饲养；B 组线栓只插入颈内动脉 9mm，术后正常饲养， 予生理盐水灌胃；C 组线栓插入颈内动脉18-20mm，术后正常饲养， 予生理盐水灌胃；D 组术后清热化瘀Ⅱ号方灌胃，余处理同C 组。参 考Longa 的5 分制法对大鼠进行神经功能缺损评分，B 组、C 组和D 组大鼠分别在术后I/R2h 后3h、6h、12h、24h 、48h 进行标本采集。 取材后，常规HE 染色并在光镜下观察各组脑组织病理形态学改变， 应用荧光定量PCR 法检测缺血侧海马区TLR3、TRAM 的mRNA 的 表达。 结果：1. HE 染色结果：光镜下A 组及B 组均未见神经元损伤， C 组及D 组有不同程度的神经元损伤，D 组在各时间点的受损神经元 明显少于C 组；2.荧光定量PCR 结果:(1)A 组与B 组TLR3 mRNA 呈 现低水平表达; C 组TLR3 mRNA 表达较B 组明显增加，差异有统计 学意义，(P ＜0.05) ；C 组和D 组中，在缺血再灌注3h，TLR3 mRNA 表达开始增加，至24h 表达达峰，48h 后表达逐步下降。D 组TLR3 mRNA 表达活性在同一时间点相比均低于 C 组，差异有统计学意义 （P0.05 ）；(2)A 组与B 组TRAM mRNA 呈现低水平表达；C 组TRAM mRNA 表达较 B 组明显增加，差异有统计学意义，(P ＜0.05) ；C 组 和D 组中，在缺血再灌注3h，TRAM mRNA 表达开始增加，至24h 表达达峰，48h 后表达逐步下降。D 组TRAM mRNA 表达活性在同 一时间点相比均低于C 组，差异有统计学意义，(P0.05) 。 结论：清热化瘀Ⅱ号方可能通过下调TLR3、TRAM 的mRNA 表达，抑制TLRs/NF-κB 信号通路的传导，减轻炎症级联反应，对大 鼠脑缺血再灌注损伤发挥神经元保护作用。 关键词：清热化瘀Ⅱ号方, 脑缺血再灌注, TLR3, TRAM Effect of Qingre Huayu Prescription Ⅱon the expression of Toll like receptor-3 and TRIF-related adaptor molecule in rats after cerebral ischemia reperfusion injury A BSTRACT Objective s: To investigate the effect of Qingre Huayu Prescript- ion Ⅱ(QRHY Ⅱ) on the expression of toll like receptor-3(TLR3) and TRIF-related adaptor molecule(TRAM) after focal cerebral ischemia/rep- erfusion(I/R) in rats and to discuss its mechanism of nerve protection. Methods:One hundred and ninety-two healthy SD rats were randomly divided into two big groups random number table. Ninety-six