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免疫磁微球在肿瘤细胞中提取应用 　　【摘要】 目的：免疫磁微球是?F代新颖的收集体液瘤细胞方法，用以发现受检患者体液中有无脱落肿瘤细胞。方法：分析比较免疫磁微球法与常规沉淀离心法收集肿瘤细胞。收集85例肿瘤患者和53例非肿瘤患者的体液，在同等体积的体液中，用免疫磁微球悬液与138例患者体液沉渣（尿液、腹水、腹腔积液、胸腔积液、乳头溢液）相混合，将收集到的可疑细胞进行常规镜检；并将138例患者体液沉渣进行沉淀离心镜检，比较两种镜检结果。结果：非肿瘤患者免疫磁微球检测方法阳性率为1.9%（1/53），沉淀离心检测方法阳性率为0（0/53）。肝癌患者免疫磁微球检测方法阳性率为91.6%（11/12），沉淀离心检测方法阳性率为33.3%（4/12）；结肠癌患者免疫磁微球检测方法阳性率为88.9%（24/27），沉淀离心检测方法阳性率为37.0%（10/27）；肺癌患者免疫磁微球检测方法阳性率为80.0%（12/15），沉淀离心检测方法阳性率为40.0%（6/15）；乳腺癌患者免疫磁微球检测方法阳性率为90.3%（28/31），沉淀离心检测方法阳性率为45.2%（14/31）。在非肿瘤患者和肿瘤患者中，免疫磁微球检测方法的肿瘤阳性检出率均高于常规沉淀离心检测方法（P 　　【Key words】 IMMS； Malignant tumor； Body fluids tumor cells First-authors address：Beijing Geriatric Hospital，Beijing 100029，China doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.36.038 磁性微球（Magnetic Microspheres，MMS）是近年来国内外研究的热点领域[1]。因其具有诸多的优良特性，如粒径小、具有超顺磁性、表面可修饰等，而被广泛应用于生物医学方向。其中，被应用于免疫学中的磁性微球，又被称为免疫磁性微球（Immunomagnetic Microspheres，IMMS）[2-4]，它是通过表面修饰赋予微球表面特殊的功能基，如-OH、-COOH、-CHO、-NH2、-SH等，这些功能基团可以与特异性免疫配基相结合[4]，使抗体或抗原固定于IMMS表面，利用抗原-抗体的高度特异性识别作用，形成“抗原（抗体）-抗体（抗原）-磁性微球”结构，从而应用于细胞分离、疾病诊断、食品和环境检测等领域。当前MMS的制备方法，主要有生物来源法、共混包埋法、单体共聚法、活化溶胀法、界面沉积法、化学转化法及共沉淀法等[3] 当体内出现恶性肿瘤后，经常有瘤细胞从肿瘤组织表面脱离、播散，侵入到血液、淋巴液中，或进入体（胸、腹、心包）腔、空腔脏器、外分泌管道中。这些脱落细胞在远隔部位可能形成转移灶，临床上如果检测到肿瘤脱落细胞，将提供至关重要的病理诊断依据[5-6]。因此，根据病情采集患者胸水、腹水、胃液、尿液、胰液、胆汁、唾液、痰液、乳头溢液、关节腔液、脑脊液等，搜寻体液中的肿瘤细胞，已成为临床诊断不可或缺的手段[7]。目前，为了收集患者体液中脱落瘤细胞，在采集待检体液后，通常经过自行沉淀和/或离心等步骤，吸取体液沉渣再进行显微镜检。少数大医院也采用流式细胞仪等手段分析体液，发现肿瘤细胞或肿瘤标志物等，当然，最终还需用显微镜进行病理细胞形态学判断。由于体液沉渣中常混杂多量正常细胞、破碎细胞和非细胞成分，不仅加大镜检工作量，而且降低了检出阳性率。为此，引用免疫磁微球材料，在显微镜检前，首先对体液沉渣进行阳性筛选 免疫磁微球以聚苯乙烯为基质，表面包被选定的单克隆抗体，制成免疫磁微球悬液备用。肿瘤细胞免疫学研究资料表明：不同类型的恶性肿瘤细胞膜表面存在各自相对特异的抗原决定簇，有别于正常细胞，如CA125、CA153、CEA、AFP、PSA、Cyfra21-1、Ferritin等蛋白质类的膜抗原物质，就是识别瘤细胞的标志物。针对不同抗原可以制备出相应的靶向单克隆抗体，包被在微球表面，形成免疫磁微球。如将选定的免疫磁微球悬液与体液沉渣混合、保温，微球表面单克隆抗体则自动导向识别恶性肿瘤细胞膜对应的抗原决定簇，并与之结合，最终形成免疫磁微球―肿瘤细胞复合体[8-9]。随后借助磁力将复合体吸出，达到阳性筛选瘤细胞目的[10]。如此，轻易排除了混杂在体液沉渣中的正常细胞、破碎细胞和非细胞成分，排除干扰镜检的诸多因素。理论上讲，附着在肿瘤细胞上的免疫磁微球数量越多，吸附瘤细胞的磁性引力越大。为此，一方面要探求两者数量最佳比值，依据经验，加入微球量：估计细胞数=1∶10为妥；另一方面与各自体积有关。由于肿瘤细胞具有高度异质性，表面抗原密度不均，体积大小不等，直径多在15 μm左右，如果微球粒度保持在1～5 μm，可