抗原诱导的人脐血CL胞活性的实验研究T细.pdfVIP

．74· 中华I临床医药 2002年第 3卷第 l9期 Journalof Chinese Clinical Medicine，2002，Vo1．3， No．19 抗原诱导的人脐血 CTL细胞活性的实验研究 吉林省肿瘤研究所 130012 张健 张立丽} 肖永臣}} 于鸿 夏风琴 [文章编号] 1562—9023 (2002)一19-0074—02 目前，脐血细胞疗法因其富含造血干细胞，增殖能力、 1．6统计学处理 采用 t检验 。 自我更新能力较强，在临床上展示了广阔的应用前景，虽然 2 结果 脐血免疫系统不成熟，但易于诱导，如脐血加 IL一2后，其所 2．1表 1显示，加 Ag后，不同效价实验组 CTL活性均有升 诱导的LAl(活性高于正常外周血LAl(活性，说明脐血免疫细 高，1：20，1：100，1：200三组差异显著，1：50组 ，只有升 胞有较强的可塑性，为了进一步探讨脐血干细胞的生物学特 高趋势，无显著差异。 性，我们用提取的肿瘤抗原来刺激脐血干细胞，测定其特异 2．2表 2显示，乳腺癌抗原诱导8天后，1：100组差异显著， 性CTL细胞的杀伤活性，为其更广泛的临床应用提供实验依 其余组织只有升高趋势，无明显差异。 据 。 表 2 人乳腺癌 Ag诱导 8天CTL细胞活性变化 1 材料方法 Ag稀释度 CTL活性 (％)X±S(n-6) 1．1脐血来源于长春市妇产医院。要求：无急慢性感染及血 O对照 31．38±9．97 液系统疾病，非高危妊娠产妇，足月顺产。脐血采集后 4C 1：5 23．O3±9．29 保存，24h内应用 。 1：1O 42．26± 18．19 1．2脐血有核细胞提取… 具体操作步骤略。 1：20 53．51± 14．57* 1．3人乳腺癌 Bcap一37细胞株，由本所常规传代培养，人 1：50 5O．39±19．76 小肠纤维 肉瘤组织 由本院手术室提供。经密度梯度法离心 1：1OO 71、O9±3．42扣I 提取抗原，用紫外分光光度计测 280nm，260nm的OD值， 注 ：}P0．05，}}P0．01(与 0对 照组相 比)。 按公式计算蛋 白含量，过渡除菌，-80C保存，人乳腺癌抗 3 讨论 原浓度为 0．07mg／ml，人 小肠纤维肉瘤组织抗 原浓度 为 机体对肿瘤的免疫作用主要足细胞免疫，面『细胞免疫中， 0．112mg／ml。 直接参与肿瘤特异性杀伤的主要是CTL细胞，近年研究表明 1．4实验分组：0对照组只加 IL-2，不加抗原，实验组加 IL-_2 。：CTL细胞大体作用过程包括：通过膜上TCR与靶细胞结 和抗原，IL一2浓度为 200“／ml。实验对照组只加效应细胞， 合，此时如无进一步的抗原可识别，CTL细胞则从靶细胞脱 不加靶细胞 。 落，如有抗原能为CTL识别，则成为紧密结合。结合后，细 1．5CTL活性测定 效应细胞：脐血干细胞预先用 IL一2和 ／ 胞 内多种 物质 被 激 活 、使膜 上 LFA-1B (Lymphocyte 或Ag刺激，分别于刺激后 4天、8天收获细胞，浓度为 5× functionassociatedantigen一1B，淋 巴细胞功能相关抗 10“／ml接种于 9