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第四章 种子的扩大培养 种子扩大培养定义 种子扩大培养定义 • 是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处于休 眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，在 经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级放大培养而获 得一定数量和质量的纯种培养物的过程。 种子扩培的目的 种子扩培的目的 接种量的需要 菌种的驯化 缩短发酵时间、保证生产水平 种子的要求： 种子的要求： 总量及浓度能满足要求 生理状况稳定，个体与群体 活力强，移种至发酵后，能够迅速生长 无杂菌污染 种子的制备过程 • 种子制备的过程大致可分为 一、实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床 等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室 完成，因此形象地将这些培养过程称为实验室阶段的种子 培养。 二、生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工 程上归为发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生 产车间阶段。 一、实验室种子的制备 （一）斜面种子的制备 1，细菌种子的制备 细菌的斜面培养基多采用碳源限量而氮源 丰富的配方。 培养温度一般为37˚C。 细菌菌体培养时间一般为1~2天，产芽孢的 细菌培养则需要5~10天。 2，霉菌孢子的制备 霉菌孢子的培养一般以大米、小米、玉米、 麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。 培养的温度一般为25~28˚C。 培养时间一般为4~14天。 3，放线菌孢子的制备 放线菌的孢子培养一般采用琼脂斜面培 养基，培养基中含有一些适合产孢子的 营养成分，如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨 和一些无机盐等。 培养温度一般为28˚C。 培养时间为5~14天。 （二）扩大种子的制备 1 液体培养法 A 好氧培养： • 用三角瓶培养微生物，如 何实现溶氧的控制？ B 厌氧培养：对于酵母菌（啤酒，葡萄酒，清酒 等） 试管→三角瓶→卡式罐→种子罐 ２固态培养法： 对于一些产孢子能力强，以及孢子发芽， 生长繁殖快的菌种。采用固体培养基大量产生 孢子，用孢子直接接种，简便，不易污染。 利用三角瓶，克氏瓶等。 实验室种子制备培养基选择的原则 培养基的选择应该是有利于菌体的生长，对孢子培养基 应该是有利于孢子的生长。 在原料方面，实验室种子培养阶段，规模一般比较小， 因此为了保证培养基的质量，培养基的原料一般都比较 精细。 二、生产车间种子制备 • 实验室制备的孢子或液体种子移种至种子 罐扩大培养，种子罐的培养基虽因不同菌 种而异，但其原则为采用易被菌利用的成 分如葡萄糖、玉米浆、磷酸盐等，如果是 需氧菌，同时还需供给足够的无菌空气， 并不断搅拌，使菌（丝）体在培养液中均 匀分布，获得相同的培养条件。 车间种子制备培养基选择的原则 目的：获得一定数量和质量的菌体，因此培养基的选择应 首先考虑的是有利于孢子的发育和菌体的生长，所 以营养要比发酵培养基丰富。 在原料方面：不如实验室阶段那么精细，而是基本接近于 发酵培养基，这有两个方面的原因: 一是成本 二是驯化 1、种子罐级数的确定 • 种子罐的作用：主要是使孢子发芽，生长 繁殖成菌丝，接入发酵罐能迅速生长，达 到一定的菌体量，以利于产物的合成。 • 种子罐级数：是指制备种子需逐级扩大培 养的次数，取决于： – 菌种生长特性、孢子发芽及菌体繁殖速度； – 所采用发酵罐的容积 细菌： 生长快，种子用量比例少，级数也较少，二级发酵。 斜面菌种→―级种子摇床培养→种子罐→发酵罐 霉菌： 生长较慢，如青霉菌，三级发酵 孢子悬浮液→一级种子罐（27˚C,40小时孢子发芽，产 生菌丝 ）→二级种子罐（ 27˚C,10~24小时，菌体迅 速繁殖，粗壮菌丝体）→发酵罐 放线菌： 生长更慢，采用四级发酵 酵母： 比细菌慢，比霉菌，放线菌快