可用于在体测量多巴胺的酪氨酸酶生物传感针的研制及应用.pdfVIP

可用于在体测量多巴胺的酪氨酸酶生物传感针的研制及应用 陈胜利1 马长清1 王江南1李黎1任恕2周宜开2 1．华中科技大学同济医学院药学院药物分析学系 湖北武汉430030 2．华中科技大学同济医学院环境医学研究所 湖北武汉430030 摘要：研制了一种可用于在体测量多巴胺的酪氨酸酶生物传感针，以微铂电极(氧分压传感针)为基 础，酪氨酸酶通过吸附交联法固定于电极表面的壳聚糖基底膜中，最佳固定化条件通过正交实验确定： x 围为5×10。7mol／L～1 干扰．经美多芭腹腔注射给药后，脑内尾核组织中的多巴胺发生了较显著的变化，给予大中小三种剂量 后尾核中多巴胺浓度的变化趋势显示代谢过程与药物剂量之间呈明显的量效相关性． 关键词：酪氨酸酶生物传感针 多巴胺在体测量 1．引言 儿茶酚胺(主要是多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素)是一类在生物体内具有广泛而重要生理作用的神经递质， 体液中浓度的变化是某些疾病如帕金森病、高血压病以及嗜铬细胞瘤等诊断的重要指标。因此，监测生物体内儿茶 酚胺类神经递质的代谢变化以及在相关药物作用下体内浓度的改变对于t述疾病的诊断及治疗具有重要意义【h烈。 我们研制的生物传感器核心为铂丝(Platinumwire，o=100rtm)，固定于玻璃毛细管中，外套不锈钢管， 这种结构的传感针具有良好的响应特性和较强的机械性，适合于进行在体测量。以溶胶壳聚糖为固酶基体， 酪氨酸酶作为主要敏感物质(分子识别作用)，科用阳离子交换树脂Nation排除电活性物质抗坏血酸和儿茶酚 验证明，该传感器具有较好的离、在体测量性质，基本适合于神经递质多巴胺的在体测量，可实时、动态的 反映出腹腔美多芭注射给药后大鼠尾核组织中多巴胺浓度的动态变化。 2．酪氨酸酶生物传感针的工作原理及结构框图 2-1工作原理 依据极谱法原理(伏安法)，固定化酪氨酸酶与载体壳聚糖膜附着在铂丝表面后，作为工作电极，与参比 电极(饱和甘汞电极或银一氯化银电极)一起构成两电极系统，连于氧分压测试仪上进行测量，取．0．65V作为 极化电压，当体系中的一定浓度的多巴胺与酪氨酸酶在溶解氧的参与下发生酶促反应时，其扩散电流(或经 转换后的氧分压)在响应时间内下降的速度(或单位时间内氧分压下降的量)与体系中的多巴胺浓度呈正相关， 依此对体系中的多巴胺进行定性与定量分析。 2．2结构框图(如图1) 图1 1一不锈钢管，卜玻璃毛细管，3—铂丝，4一敏感膜(从里到外依次为壳聚糖膜(内含一定量的酪氮酸酶)、Nation膜等) 373 3．实验部分 3．1实验仪器与材料 双通道氧分压测试仪(由华中科技大学同济医学院环境医学研究所研制)：JP—303型极谱仪(成都仪器厂 Instrument Lab，Tokyo，Japan) (昆山市超声仪器厂生产)；SN．3型立体定位仪(Scientific 武汉注射针厂生产)；毛细玻璃管(自制)；酪氨酸酶(tyrosinase，T3824，EC 醛(25％水溶液，分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司)、盐酸多巴胺(Dopamine sigma公司)、抗坏血酸(天津科源化学试剂有限公司，分析纯)、美多芭片(o．259，每片内含0．2g左旋多巴， 有限公司)。 3．2离体实验部分 吸附法原理将浓度为1％(w／『v)的壳聚糖溶胶液涂附于基体铂电极表面，采用吸附交联法固定酪氨酸酶， 取出，亚沸水洗去针表面未被固定牢固的酪氨酸酶和戊二醛后，在1％(v／v)Nafion溶液中浸涂两次，每次浸 涂时间为lOs。存于50mmol／L pH7．4的缓冲溶液中4C冰箱里备用。 9min内传感针在其中的响应曲线；溶液中加入一定量的盐酸多巴胺储备液，搅拌均匀，记录9min内传感针 在其中的响应曲线，逐点扣除空白溶液中的响应值后取3～4min内响应差值(△kpa)与溶液中多巴胺浓度的负 对数呈正相关。 3．3在体实验部分 位坐标以鼠脑前囟中央为参考点，坐标：Ap．+1．1mm；