蛋白诱导-LJ课件.pptVIP

实验四 基因的诱导表达与融合蛋白的纯化 实验目的 掌握基因诱导表达的原理与方法 掌握蛋白质纯化的基本原理 巩固蛋白质电泳的基本方法 一、基因表达系统 二、表达瓶颈 1、蛋白翻译后折叠、修饰； 2、蛋白翻译后易降解、形成包涵体； 3、蛋白分离纯化、复性； 4、基因表达调控。 三、表达方式 融合蛋白 1、基因融合：将两个或多个开放阅读框架按一定顺序连接在一起，表达产物是一个杂和蛋白，靶蛋白连接在运载蛋白（识别标签）的氨基端或羧基端。 2、应用潜力： 简化靶蛋白的标记与分离； 靶蛋白与信号肽连接，将靶蛋白分泌到特定细胞区； 保护靶蛋白免受宿主蛋白酶降解； 改善靶蛋白溶解性，防止形成包含体。 识别标签 β-半乳糖苷酶（lac-Z） 谷胱甘肽-S-转移酶（GST） 多聚组氨酸（poly-his） 人工7肽FLAG 四、表达体系选择 常用体系—大肠杆菌体系（菌株+载体） 依据： 蛋白大小（100 amino acid residue） 蛋白数量 蛋白活性要求（产生抗体、生物学研究、 结构研究） 六、实验原理 重组蛋白的表达方式与纯化方式是由表达载体决定的。 在原核表达系统，表达载体均携带一个条件表达的启动子，由这一启动子控制外源基因