酶工程-酶分子修饰-Enzyme Engineering.pptVIP

第六章 酶分子修饰 酶分子修饰的定义 酶分子修饰（enzyme molecule modification ）：通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变酶的某些特性和功能的技术过程。 酶分子的结构决定了酶的性质和功能。当酶分子的结构发生改变时，将会引起酶的性质和功能的改变。 酶分子的完整空间结构赋予酶分子以生物催化功能。 优点：催化效率高、专—性强、作用条件温和。 弱点：稳定性较差、活性不够高、可能具有抗原性。 酶分子修饰的作用和意义 改进酶的性质和功能 提高酶的活力 activity 增强酶的稳定性 stability 降低或消除酶的抗原性 immunological property 酶学研究 研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子和各种物理因素对酶分子空间构象的影响，可以进一步探讨其结构与功能之间的关系 structure and function 。 酶分子修饰的方法 酶分子主链修饰 主链的切割修饰 主链的连接修饰 酶分子的侧链修饰 酶分子侧链基团的小分子化学修饰 分子内交联修饰 大分子结合修饰 亲和修饰 酶分子的组成单位置换修饰 酶分子的金属离子置换修饰 酶分子的物理修饰 第一节 酶分子的主链修饰 定义 酶分子的主链修饰（main chain modification）就是利用酶分子主链的切断和连接，使酶分子的化学结构及空间结构发生某些改变，从而改变酶的特性和功能的技术方法。 酶分子的主链修饰的技术方法 A. 主链切断修饰 采用人为的方法将酶分子的主链切断，使酶分子的化学结构及空间结构发生改变，从而改变酶的特性和功能 B. 主链连接修饰 将两种或者两种以上的酶通过主链连接在一起，形成一个具有两种或多种催化活性的新的酶分子 一、主链切断修饰 酶分子的主链包括肽链和核苷酸链。 主链的切断修饰一般使用专一性较高的酶作为修饰剂。 主链被切断后可能出现下列情况： （1）引起酶活性中心的破坏，酶将丧失其催化功能。 作用：探究酶活性中心的位置。 （2）仍然可维持酶活性中心的空间构象，则酶的催化功能可以保持不变，或损失不多，但是其抗原性等特性将发生改变。 提高某些酶特别是药用酶的使用价值。 许多药用酶属外源物质，受机体排斥 大分子外源蛋白具有较强的抗原性 肽链的有限水解修饰：用适当的方法使酶分子的肽链在特定位点断裂，使相对分子量减少，可以在基本保持酶活力的同时使酶的抗原性降低或消失。 如木瓜蛋白酶用亮氨酸氨肽酶进行有限水解，能够除去2/3的肽链，该酶的活力基本保持，但其抗原性大大降低 酵母的烯醇化酶经肽链有限水解，除去由150个氨基酸残基组成的肽段后，酶活力仍然可以保持，抗原性却显著降低。 （3）有利于酶活性中心的形成，则可使酶分子显示其催化功能或使酶活力提高。 特别针对有些生物体生物合成得到的不显示酶催化活性的酶原的修饰加工。 如：胰蛋白酶原转化为胰蛋白酶的过程。 胰蛋白酶原（trypsinogen）的水解激活 核苷酸链剪切修饰Nucleotide chain cleavage modification 仅见于 R 酶的分子修饰，指在核苷酸链的限定位点进行剪切，使 R 酶的结构发生改变，从而改变其催化特性的方法 天冬氨酸酶通过胰蛋白酶修饰，从其羧基末端切除10个氨基酸残基的肽段，酶活性提高5倍左右。 二、主链连接修饰 是指将两种或者两种以上的酶通过主链连接在一起，形成一个酶分子具有两种或者多种催化活性的酶分子修饰方法 在一个酶分子上具有两种或多种催化活性的酶被称为多酶融合体 多酶融合体可以是单体酶也可以是寡聚酶。 主链连接修饰的方法 基因工程技术与酶工程技术交叉融合 经过分子生物学操作，将两种或两种以上的酶的基因融合在一些形成融合基因，再经过克隆和表达，就有可能获得各种多酶融合体 天冬氨酸激酶—高丝氨酸脱氢酶融合体 双头酶（double-headed enzyme）：一条主链具有两种酶活性的酶。 第二节 酶分子的侧链基团修饰 酶分子侧链基团修饰（side residues modification）就指是通过采用一定的方法使酶分子的侧链基团发生改变，从而改变酶分子的特性和功能的修饰方法。 酶分子的侧链基团修饰的作用 ① 研究各种基团在酶分子中的作用及其对酶的结构、特性和功能的影响，分析酶的活性中心中的必需基团 修饰后不引起酶活力显著变化——非必须基团 修饰后酶活性显著降低或消失——必需基团 ② 测定某一种基团在酶分子中的数量 氨基——三硝基苯磺酸 巯基——对氯汞苯甲酸 羧基——碳二亚胺 咪唑基——四唑重氮盐 ③ 提高酶的活力、增加酶的稳定性、降低酶的抗原性，并且可能引起酶催化特性和催化功能的改变，以提高酶的使用价值 ④ 可以获得自然界原来不存在的新酶种 抗体酶 人工R酶 （1）蛋白类