HLA测序技术在非亲缘性脐血移植应用价值探讨论文.docVIP

　　HLA测序技术在非亲缘性脐血移植应用价值探讨论文 廖灿， 杨昕， 李焱， 黄以宁， 许遵鹏， 吴洁莹， 汤雪薇， 陈劲松.freelers）低分辨结果进行了比较分析。结果发现，HLA不合位点不多于2个和HLA不合位点不少于3个的病例GVHD的发生率具有统计学显著性差异（P 0.05）。在对HLA-A、B、DRB1等位基因高分辨单因素分型结果中，HLA-B和HLA-DRB1等位基因匹配全相合的病例GVHD发生率显著低于不完全相合病例GVHD的发生率（P=0.000，P=0.005）。结论：PCR-SBT技术在非亲缘性脐血移植HLA配型方面具有重要的临床应用价值。 【关键词】 非亲缘性脐血移植； HLA 配型; HLA测序技术；HLA-SBT； 脐血 Clinical Application of HLA Sequencing in Unrelated Umbilical Cord Blood Transplantation AbstractFrom June 1998 to July 2004, Guangzhou umbilical cord blood bank provided unrelated umbilical cord blood for 54 patients to more than 21 transplantation centers. HLA sequencing-based typing (SBT) ation about 48 out of 54 patients onths of follobilical cord blood units, and the obtained results ismatched HLA sites and less than 3 sites single factor analysis and high-resolution typing of HLA-A,B and DRB1 alleles, the mismatch betportant role in umbilical cord blood transplantation, and the incidence of GVHD is higher in the transplantation ismatching. Key bilical cord blood transplantation; HLA mismatch; HLA sequencing; HLA sequencing based typing; umbilical cord blood HLA高分辨分型技术不仅可以对HLA血清学配型起到积极的校正作用，对研究哪些HLA等位基因相合可以明显减弱GVHD，哪些等位基因不相合可以耐受等方面以及制定相对个体化的HLA配型策略都具有重要的临床应用价值。在骨髓造血干细胞移植中，HLA测序分型技术得到了广泛的应用和发展，在预防GVHD方面具有十分重要的意义。本研究采用以测序为基础的HLA分型技术（HLA-sequencing based typing HLA-SBT）对可随访的48例非亲缘性脐血移植病例HLA配型结果进行回顾性分析，以探讨HLA-A/B/DRB1等位基因匹配程度对非亲缘性脐血移植GVHD的影响。 材料和方法 脐血来源 脐血样本全部来自广州脐血库，脐血分离、冷冻、保存以及相关检测参考相关文献［2］。 移植供受体选择 54例非亲缘性脐血移植供受者样本及随访资料由国内21家移植中心提供，其中6例待随访，选择48例非亲缘性脐血移植病例进行回顾性分析，移植受者一般情况见表1。Table 1. General characteristics of 48 UCBT recipients（略） 急性移植抗宿主病（aGVHD）的预防 48例移植病人均采用环孢霉素+甲基强的松龙方案预防aGVHD。 移植供/受体的DNA提取 移植供/受体DNA提取均采用G T DNA提取试剂盒。 HLA-SSP分型 采用One Lambda公司的HLA-SSP分型试剂盒、PE9700PCR仪进行分型，采用One Lambda公司提供的HLA分型格局表判读结果。 HLA-SBT分型 应用ABI PRISM3100型测序仪进行分型。DNA 4 μl与PCR Mix（Forensic公司提供）16 μl混合，再加入金牌酶0.3 μl进行扩增反应。PCR条件如下：95℃ 10分钟；96℃ 20秒，60℃ 30秒， 72℃ 3分钟，36个循环；4℃ forever。取PCR产物5 μl在2%琼脂糖凝胶中电泳，确定是否扩增。向PCR产物中加入3 μl Exo SAP-IT,进行消化反应：37℃ 20分钟，