p38 MAPK在局灶性脑缺血大鼠缺血中心区和半影区的表达论文.docVIP

　　p38 MAPK在局灶性脑缺血大鼠缺血中心区和半影区的表达论文 蒋淑君 杨丽娟 刁汇玲 王华 【摘要】 目的 研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间皮质半暗带和中心区p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化水平和蛋白水平的表达。方法 用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型, 分别于术后1、3、6、12、24 h剥取缺血半暗带及中心区皮质组织,应用APK磷酸化水平和蛋白表达量。结果 与假手术组相比，模型组大鼠皮层缺血核心区和半影区p38 MAPK磷酸化水平显著升高(P 0.05,n=6)，缺血中心区p38 MAPK在缺血6 h磷酸化程度达高峰，半暗带在3 h时达高峰;各组间p38 MAPK蛋白表达量水平无明显变化。结论 p38 MAPK磷酸化激活参与了大鼠脑缺血损伤过程的信号转导，在缺血中心区和半影区的磷酸化增强可能与局部脑缺血损伤的神经元坏死和凋亡过程有密切关系。 【关键词】 局灶性脑缺血;缺血中心区;半影区;p38丝裂原激活蛋白激酶 【Abstract】 Objective To investigate the expression of phosphorylated p38 mitogen activated protein kinase (pp38 MAPK) and protein expression levels at different ischemic time point in focal cerebral ischemic core and penumbra of rats.Methods Focal ischemic models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) in rats ade by inserting nylon thread.Brain samples ischemic core and penumbra. APK and protein expression levels in the brain of rats.Results APK peaked at 6 hours in core ischemia and at 3 hours in penumbra. Hoay be involved in the signal transduction pathia.The increase of pp38 MAPK in the central area of ischemia and penumbra may play a role in neuronal necrosis and apoptosis. 【Key ia,ischemic penumbra field,central area of ischemia,p38 MAPK 脑缺血性损伤是常见的病理生理过程,近来研究发现脑缺血导致丝裂素活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)家族的迅速激活。MAPK途径是细胞外信号引起细胞核反应的共同通路。p38 MAPK是MAPK家族的3个主要成员之一,多种细胞外刺激如应激、细胞因子以及G蛋白耦联受体的激活等均可导致p38 MAPK的磷酸化,从而激活p38 MAPK信号通路1。在神经系统p38 MAPK存在于大脑皮质、海马、小脑及脑干等脑区的神经核团,.freela公司),辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔抗体和山羊抗鼠抗体( 二抗, Chemicon 公司),ECL反应底物(Chemicon 公司)和Gel Doc 凝胶成像分析系统(美国BioRad 公司),BCA 蛋白定量试剂盒(美国PIERCE 公司),Kodak BioMaxMR X光片( 美国Kodak 公司),蛋白酶抑制剂(AEBSF,leupeptin,aprotinin,pepstatin A,chymostrypsin)、磷酸酶抑制剂(KF, okadaic acid,sodium pyrophosphate,sodium orthovanadate)、sodium deoxycholate、DTT、NP 40、EDTA、EGTA、TTC等试剂(美国Sigma 公司)。 1.2 局灶性脑缺血损伤模型的建立 采用大鼠大脑中动脉栓塞术(middle cerebral artery occlusion ,MCAO)。大鼠随机分成假手术组(n=6)和手术组(n=30)。10%的水合氯醛腹腔内注射麻醉(0.3 ml/100 g) ,仰卧位固定,颈正中切口,逐层分离,暴露右侧颈总动脉、颈内动脉和颈外动脉;为避免刺激迷走神经,电凝切断颈外动脉分支,结扎并游离颈外动脉主干的一段备用;沿颈内动脉头端分离、显露并结扎翼