PLK1基因沉默对K562-A02细胞周期、增殖和耐药性的影响论文.docVIP

　　PLK1基因沉默对K562/A02细胞周期、增殖和耐药性的影响论文 .freelRNA的siRNA真核质粒，导入K562/A02细胞，用RT-PCR和）的积累量；MTT试验检测细胞对ADM的药物敏感性。结果显示.freelRNA下降（34.7±2.1）%和（56.6±1.5）%，蛋白水平下降（49.9±3.2）%和（62.1±1.7）%；转染24和48小时后，细胞存活率下降了30%和59%；转染48小时后，G2/M期细胞比例提高了2.77倍，同时细胞内ADM积累量显著提高；对ADM药物敏感性的相对率为73.8%。结论： PLK1基因沉默能有效抑制K562/A02细胞生长，使细胞周期停滞在G2/M期，同时使得细胞内ADM积累量提高，对ADM敏感性增强。 【关键词】 PLK1基因沉默 Effect of PLK1 Gene Silence on Cell Cycle，Proliferation and Drug Resistance in K562/A02 Cells Abstract The study all interference RNA (siRNA) targeting Polo-like kinase 1 (PLK1) gene on cell cycle progression，proliferation and drug resistance in K562/A02 cells.siRNA plasmid vector specifically targeting PLK1 gene RNA and protein ycin（ADM）accumulation ined by floetry; 50% inhibition concentration (IC50) of ADM on K562/A02 cells ined by MTT method.The results shoid reduced PLK1 mRNA expression by（34.7±2.1）% for 24 hours and by（56.6±1.5）% for 48 hours，PLK1 protein significantly decreased simultaneously by (49.9±3.2)% and by (62.1±1.7)%.After being transfected for 24 and 48 hours，the rate of survival cells decreased by 30% and 59% respectively.Forty-eight hours after transfection，the ratio of K562/A02 cells at G2/M increased by 2.77-fold，at the same time，intracellular ADM accumulation increased and the relative efficiency of K562/A02 cells to ADM ulation，so that enhance cell sensitivity to ADM. Key id; K562 cell/A02 cell; cell cycle; drug resistance Polo样激酶1（Polo-like kinase 1，PLK1）为polo样激酶家族的成员之一，其基因由于和果蝇Polo基因序列具有高度同源性，且基因编码产物表现为丝氨酸/苏氨酸激酶特性而得名。PLK1主要参与细胞有丝分裂调控：促进cyclin B/Cdc2的激活，协助中心体的功能成熟和双极性纺锤体的形成，调节促后期复合体（anaphase-promoting plex，APC）参与有丝分裂晚期事件，以及影响胞质分裂等［1］。研究发现，PLK1在多种肿瘤细胞中异常高表达，抑制其功能或表达会导致细胞周期停滞并诱导细胞凋亡，推测PLK1可能与肿瘤细胞的增殖、凋亡密切相关［2］。本研究采用小RNA干扰技术抑制K562/A02耐药细胞中PLK1的表达，分析其对细胞周期和增殖的影响，并初步探讨其在逆转细胞耐药方面的可能作用。 材料和方法 材料 细胞系 人红白血病细胞系K562为华中科技大学同济医学院免疫室惠赠，经阿霉素诱导产生的耐药细胞系K562/A02购自中国医学科学院血液病研究所。 主要试剂 TRIZOL试剂、Lipofactamine 2000和Opti-MEMⅠ购自Invitrogen公司；逆转录试剂盒、Taq酶和dNTP购自MBI公司；兔抗人PLK1多克隆抗体购自Biolegend公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体购自Pierce公司；MTT