免疫血液学基础_培训课件.ppt

* 玻璃珠 球状外形 直径70~80um 批间稳定无差异 惰性物质，理化性质稳定 耐受高速离心 功能类似过滤器 未凝集的RBC （阴性） 凝集的RBC （阳性） 离心力作用 * 密度梯度稀释液 离心力作用 未结合的血清蛋白（低密度）停留在密度梯度稀释液上面 血清与红细胞的混合物（中间密度）在密度梯度稀释液中 红细胞（高密度）移动进入玻璃珠中 * 反应结果示意图 注：玻璃珠的作用象一个过滤器，可以将凝集的红细胞“阻挡”在玻璃珠上面；未凝集的红细胞则可自由通过玻璃珠而到达柱的底部 阳性反应 阴性反应 * 结果判读 * Ortho BioVue 试剂卡操作示意图 加样 离心 孵育 读卡 一共发现有23种血型系，超过500种抗原。 Ortho建立之初即资助Philip Levine 博士进行Rh血型的研究，1947年推出第一个Rh血清凝集试剂和抗人血清 1956年建立并推广全球第一个标准化交叉配血方法及程序 1968：第一个防止新生儿Rh系统溶血的药物－RhoGAM上市； 1997：全球第一台全自动血型分析系统AutoVue?问世。 估计2006年全球免疫血液学市场总计850.1MM USD，北美和欧洲占75％，日本11％，其他地区14％ * 我国的采供血程序及输血前检测 志愿献血员 血液中心（中心血站） 初检 复检 医院 输血 筛选合格 献血员 问卷 快速测试 传染病检测：HBs Ag, HCV, HIV ,ALT, Syphilis 红细胞定型（正定） 采血 进口或国产试剂 随机检测 输血前检测 （1）住院患者血型定型（正定） （2）用血患者血型在此定型（正反定型）， （3）交叉配血，抗体筛查，抗体鉴定 多数医院输血前不再进行传染病检测 * 红细胞血型血清学检测技术 盐水凝集法 低离子强度盐水法 酶技术 凝聚胺技术 抗人球蛋白检测法 柱凝集技术检测法 * 一、盐水凝集法 红细胞和抗血清在盐水溶液中直接反应 特点是操作简便，设备简单，缺点是影响因素多，灵敏度低 孵育30分钟 * 二、低离子强度盐水法 通过降低介质溶液的离子强度，减少红细胞外围离子云的强度，促进IgG分子在两个红细胞间桥联，而促进凝集 特点是缩短抗原抗体反应时间，提高反应灵敏度 孵育1分钟 * 三、酶技术 利用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面唾液酸，使红细胞失去电荷，缩小细胞间距离 同时改变红细胞膜表面结构，使某些隐蔽的抗原暴露，从而增强凝集反应 主要用于一些不完全抗体的检测 * 四、凝聚胺技术 利用多聚季胺盐在介质溶液中产生大量正电荷中和红细胞表面的负电荷，减少红细胞间排斥，促进凝集 * 五、柱凝集技术检测法 是微柱凝集技术与上述所有技术相结合的产物 1986年由法国人Dr.Yves Lappierre发明 1994年获得美国FDA认证，目前在许多发达国家已经作为常规技术应用于临床 柱凝集技术原理 * 六、抗人球蛋白试验Coombs试验 在盐水凝集法或低离子强度盐水法的基础上，加入抗人球蛋白抗体，通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用，促进红细胞的凝集 * + Anti-Human Globulin (AHG) 试剂 致敏红细胞的IgG抗体 或补体成份 加入抗人球蛋白试剂后 形成肉眼可见的凝集反应 抗人球蛋白实验 * 抗人球蛋白实验 1. 红细胞致敏反应 2. AHG反应 肉眼不可见 肉眼可见 * 直接抗人球蛋白实验(DAT) 红细胞在体内(in vivo)即被不规则抗体所致敏，因此直接加入抗人球试剂即可进行测定；如某些过敏性药物及引起溶血性输血反应的抗体、自身抗体等 间接抗人球蛋白实验(IDAT) 红细胞在体外(in vitro)首先被不规则抗体或抗血清试剂所致敏，然后再加入抗人球试剂进行测定；如抗体筛查、抗体鉴定、交叉配血等 抗人球蛋白实验 * 医院输血科的主要职责 提供临床所需的血液成份 提供血型相符或配合的血液 为临床提供血型相关的检测诊断 * 输血前测试流程 * 常用输血前测试方法 1. 平板法 - 细胞浓度适宜，避免交叉污染，及时观察结果 2. 试管法 - 加样顺序，反应条件，洗涤细胞注意事项 3. 微量板法 - 加样和振荡避免交叉污染 4. 柱凝集法 - 避免假阳性，使用前观察凝胶板 * ABO血型鉴定 Rh血型鉴定 红细胞血型抗体筛查/鉴定 交叉配血试验 HDN血型血清学检查 常用输血前检测项目 * 方法: 红细胞凝集试验 正定型 用已知抗-A或抗-B定型试剂来测定红细 胞上有无相应的A抗原或/和B抗原