免疫组化与细胞形态学研究_培训课件.ppt

PBS 3.2.9. PBS冲洗3次，每次5 min。 3.2免疫组织化学染色： 3.2.10.用前30 min ，按一定比例混合A液（亲和素）和B液（酶标生物素）形成亲和素—生物素亚饱合复合物（稀释倍数1：1：100），室温孵育40 min。 标 签 3.2免疫组织化学染色： PBS 3.2.11. PBS冲洗3次，每次5 min。 其间配制DAB-H2O2显色液（2.5 ml DAB，加1 μl H2O2） 3.2免疫组织化学染色： 3.2.12. DAB-H2O2显色，冷蒸馏水冲洗、PBS冲洗，自来水洗净。 显色应注意温度与时间的关系，室温宜5分钟。 染色稍浅亦可拿出，脱水，封片后颜色可加深。 标 签 3.2免疫组织化学染色： 3.2.13. 用苏木精复染 标 签 3.2免疫组织化学染色： 3.2.14. 脱水、透明 70%乙醇 80%乙醇 90%乙醇 100%乙醇I 100%乙醇II 二甲苯I 二甲苯II 每级1min 3.2免疫组织化学染色： 3.2.15. 封片： 加中性树胶封片 3.2免疫组织化学染色： 第一抗体由PBS取代同步进行以上实验。 3.3对照设置： 2.实验材料 成体家鸡 2.1实验动物 2.2主要试剂 2.实验材料 一抗：5-HT抗体 北京中山生物技术有限公司 VECTASTAIN ABC 免疫组织化学试剂盒：包括正常血清、试剂A、试剂B和二抗，由美国ZYMED公司生产。 氯化钠、苦味酸、甲醛（36%） 、乙醇、二甲苯、石蜡、硫酸铬钾、明胶、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾 、氯化钾、Tris、30%过氧化氢、3，3-二氨基联苯胺（DAB） 、盐酸、氢氧化钠,苏木精，高锰酸钾，钾矾。 2.3其它试剂 2.实验材料 LEICA组织切片机 展片台 电热恒温培养箱、冰箱 电子天平 酸度计 移液器 LEICA 显微镜 2.4 仪器设备 2.实验材料 以石蜡切片为例 写出组织细胞处理的过程 主要内容 第一节 免疫组织化学的定义 第二节 免疫组织化学中的免疫化学 第三节 组织细胞的处理 第四节 免疫组织化学染色的原理和方法 第五节 免疫组织化学的实际应用 第五节 免疫组织化学的实际应用 第五节 免疫组织化学的实际应用 题目： 家鸡消化道内5-HT细胞的免疫组织化学定位 家鸡消化道内5-HT细胞的免疫组织化学定位 实验目的 本实验拟对家鸡消化道5-HT细胞进行鉴定和定位研究。 实验材料： 实验方法： 结果： 讨论： 3.实验方法 3.1石蜡切片的制备 3.1.1.取材： ①用绳系于家鸡颈部，窒息死亡。 3.实验方法 3.1.1取材： ②剖开体腔 3.1.1.取材： ③取消化道各段：食管、嗉囊、腺胃、十二指肠、空回肠、盲肠和直肠。 取材大小：0.5cm 3.实验方法 3.1.2.固定： 用生理盐水洗净后，投入改良的Bouin’s液中固定12-24h过夜。 3.实验方法 3.1.3.保存： 将固定液倒出，固定后的组织用70%酒精洗2次。可在70%酒精中暂时保存。 3.实验方法 3.1.4.脱水：梯度酒精脱水 80%乙醇 3 h 90%乙醇 3 h 95%乙醇I 2 h 95%乙醇II 2 h 无水乙醇I 2 h 无水乙醇II 2 h 3.实验方法 3.1.5.透明： 1/2无水乙醇+1/2二甲苯 2 h（可过夜） 二甲苯I 2 h 二甲苯II 2 h 3.实验方法 3.1.6.浸蜡： 选取熔点为60℃的石蜡 首先在60℃条件下熔解石蜡 烘 箱 3.实验方法 3.1.6.浸蜡：在60℃条件下进行 1/2二甲苯+1/2石蜡 2 h 纯石蜡I 2 h 纯石蜡II 2 h 3.实验方法 3.1.7.包埋： 将液体石蜡倒入包埋筐内，放入标签，贴着筐壁，字向外，用酒精灯加热镊子，用镊子搅动筐中央稍有些凝固的石蜡，将材料放入筐中央部位。 室温下凝固变硬成蜡块 3.1.8.切片： 把包埋好的蜡块用刀片修切成正方形或长方形，注意勿太靠近组织，让组织四周留有少许石蜡。蜡块两边必须切成平行的直线，以免切下的蜡条弯曲。 3.1.8.切片： 将上表面放有碎石蜡的手术刀在酒精灯上加热。 将熔好的蜡液涂在木块上表面。 再次加热刀片，将刀片放于木块与