红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚psy基因的分离大学本科论文.docVIP

正文： 红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离 PAGE 2 9 本科生毕业设计（论文） 题 目：红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离 学 院： 化学与生命科学学院 毕业设计（论文）原创性声明和使用授权说明 原创性声明 本人郑重承诺：所呈交的毕业设计（论文），是我个人在指导教师的指导下进行的研究工作及取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或组织已经发表或公布过的研究成果，也不包含我为获得 及其它教育机构的学位或学历而使用过的材料。对本研究提供过帮助和做出过贡献的个人或集体，均已在文中作了明确的说明并表示了谢意。 作 者 签 名：　　 　 　　日　 期：　　 　 　　  指导教师签名：　　 　 　　 日　　期：　　 　 　　 使用授权说明 本人完全了解 大学关于收集、保存、使用毕业设计（论文）的规定，即：按照学校要求提交毕业设计（论文）的印刷本和电子版本；学校有权保存毕业设计（论文）的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务；学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。 作者签名：　　 　 　　 日　 期：　　 　 　　  目 录 摘要 1 英文摘要 1 1 引言 1 2 材料 2 2.1 植物材料 2 2.2 实验试剂 2 2.3 主要仪器和设备 2 3 方法 3 3.1 总RNA提取 3 3.1.1 常用试剂配制 3 3.1.2 器具处理与准备 3 3.1.3 提取RNA 3 3.2 RNA的纯化 4 3.3 RNA提取质量与含量检测 4 3.3.1 总RNA的电泳分析 4 3.3.2 总RNA含量与纯度测定 4 3.4 cDNA链合成 5 3.4.1 cDNA一链的合成 5 3.4.2 cDNA第二链合成 5 3.5 基因的克隆及序列分析 6 3.5.1 基因的克隆 6 3.5.2 割胶回收 6 3.5.3 T-载体连接 6 4 结果与分析 7 4.1 RNA电泳结果分析 7 4.2 RNA紫外分光光度计测定结果分析 7 4.3 纯化后RNA电泳结果分析 8 4.4 合成cDNA电泳结果分析 8 4.5 PSY基因的克隆 9 4.6 序列性分析 9 5 讨论 12 参考文献 14 致谢词 16 红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚PSY基因的分离 化学与生命科学学院 生物科学专业 付文佳 指导老师：杨莉（副教授） 摘要：采用改良Bugos法提取红肉蜜柚及其亲本琯溪蜜柚成熟果实果肉RNA，逆转录合成cDNA。根据NCBI网站公布的PSY基因全序列设计引物，采用高保真Taq聚合酶进行PCR扩增，将扩增产物连接到pUCm-T载体，转化至大肠杆菌DH5α，并送公司测序。比较发现，红肉蜜柚和琯溪蜜柚果肉PSY基因全长均为1317 bp，编码439个氨基酸，序列比对结果显示两者PSY基因与柑桔属PSY基因同源性都相对较高，同源性最高达99 %。 关键词：红肉蜜柚；琯溪蜜柚；PSY基因；基因分离；序列分析 Isolating PSY Gene from Red-fleshed Sweet Pomelo and Its Parent Guanxi Sweet Pummelo FU Wen-jia Director: YANG Li (College of Chemistry and Life Science, Zhejiang Normal University, 052 Abstract：The total RNA was extracted from the ripe fruit of Red-fleshed sweet pomelo and Guanxi sweet pomelo using improved Bugos RNA extraction method, then were synthesised cDNA by reverse transcriptase kit. At the same time, we designed primers for PSY gene sequences according to the information PSY gene sequences on NCBI, high-fidelity Taq polymerase were us