w13章遗传病诊断_培训课件.ppt

2.18三体综合征 （1）弓纹↑（80% 7↑） （2）小指1指褶（40%）（3）通贯手（25%） （4）∠atd＞700 （25%） 3.13三体综合征 （1）弓纹↑ （2）双通贯手（62%） （ 3） ∠atd＞700 （81%） 4.Turner syndrome : ∠atd大，斗↑ 5.Klinefelter syndrome :弓纹↑ 总结：多种CS病共有皮纹特点 ∠atd大，通贯手，弓纹↑，球部胫弓。 2.基因诊断的方法选择： 各种遗传病的基因异常是不同的，同一遗传病也可以有不同的基因异常，但这些异常大体可分为基因缺失和突变两大类型。根据对基因异常类型的了解，可以采用不同的诊断方法。 遗传的基因诊断方法 基因异常 方法 探针、引物或限制酶 基因缺失 基因组DNA印迹杂交\PCR扩增 缺失基因的探针 引物包括缺失或在缺失部位内 点突变 RFLP分析\ASO杂交 突变导致其切点消失的限制酶 PCR产物的多态性分析 正常和异常的ASO探针 （RFLP、SSCP、DGGE） 引物包括突变部位 基因已知 基因内或旁侧序列多态性 基因内或旁 但异常不明 （RFLP、 SSCP、AMP－FLP） 侧序列探针或引物 连锁分析 基因未知 与疾病连锁的多态性， 与疾病连锁的多态 如SSCP、AMP－FLP连锁分析， 位点探针或引物 RFLP位点单体型连锁分析 （三）基因诊断在遗传病诊断中的应用 1． 对单基因病的基因诊断 （1）点突变型遗传病的基因诊断 ①镰形细胞性贫血的基因诊断 ASO探针诊断法： RFLP诊断法： RFLP(restriction fragment length polymorphism): 不同人的DNA用同一种限制酶切割，可切出不同长度的片段。 例：Hbs病 β6 GAG（谷）→GTG（缬） MstⅡ可识别并切割βA:CCTGAGG序列 不能切割βs: CCTGTGG序列 此切点消失 IVS-Ⅰ 1.15kb MstⅡ切点 1.15kb 0.2kb HbA 1.35kb A→T HbS 1.15kb 1.35kb 0.2kb 正常 杂和体 HbS病 失 ②无过氧化氢酶血症（acatalasemia) （略） 是一种常染色体隐性遗传病，患者过氧化氢酶活性只有正常人的0.2%～0.4%，杂合体血液中过氧化氢酶活性则处于中间水平。过氧化氢酶基因由13个外显子和12个内含子组成。 应用32P标记PCR反应中底物 方法，扩增第4个外显子和内 含子附近的203bp片段，应用 SSCP法可清楚地判断患者和 杂合体。 aa/aa aa/- aa/a- a-/-- --/- 14kb 10kb 10kb 4kb BamH I BamH I 左侧：16号染色体上携有数目不同的基因 右侧：a基因探针杂交的结果 ① ?-地贫基因缺失的诊断 正常 贫血 症状 携带者 HbH （2）基因缺失型遗传病的诊断 RFLp诊断（略）： PCR诊断： （polymerase chain reaction ,) PCR原理 （参下页举例） 950C → 560C →720C 变性 退火 延伸 例：诊断Barts胎儿水肿综合征。 1）建立反应体系 2）DNA扩增 3）电泳检测 待测DNA α基因引物 dTNP Taq酶 950C → 560C →720C 变性 退火 延伸 α基因 ②DMD／BMD的缺失型诊断： （3）基因异常不明的遗传病的诊断 以苯丙酮尿症( PKU )的基因诊断为例。 RFLP分析： p202上 一个PKU家系的RFLP单体型分析 （略） （略） 单体型分析 PKU，AR 1 2 Ⅰ Ⅱ 1 2 3 5.6 Kb 5.2 Kb 4.2 Kb 4.0 Kb Hind Ⅲ SphⅠ 11.0 Kb 9.7 Kb 7.0