KEGT基因对冷季型草坪草的转化及转基因草坪草的耐盐性鉴定.pdf

摘 要 冷季型草坪草以其绿期长、草坪质量高，具有美化和观赏功效，并能为人们的娱乐、休闲和 体育运动提供场所，而受到亲睐。高羊茅和多年生黑麦草是目前种植广泛的冷季型草坪草种。近 些年来，由于世界范围内的水资源紧缺，土地的盐碱化、次生盐渍化的不断加剧，使人们开始重 视抗旱、耐盐碱草坪草品种。这些草坪草品种不仅可以减少浇灌次数，节约水资源；还可以拟制 土壤返盐。另外，我国土壤盐渍化也十分严重，而如何利用大面积盐碱地是我国目前需要解决的 问题。研究草坪草对逆境胁迫的反应机制,提高草坪草的抗逆境胁迫能力，培育抗旱、耐盐等抗逆 性强的草坪草新品种，对严重缺水区域、盐碱区域有很大的应用价值。 本研究的目的是通过农杆菌介导技术将 Los5 、ABAR 、NCED3 、ICE1 、CBF3 基因转入高羊 茅和多年生黑麦草，提高植物抗旱、耐盐能力；以及对转基因草坪草进行盆栽和田间的实验。本 研究的主要结果如下： 1、对本实验室的高羊茅和多年生黑麦草的胚性愈伤组织高频诱导与再生体系进行了优化。 结果表明：（1）最佳分化培养基 MS+6-BA2mg/L +2,4-D0.2mg/L+水解酪蛋白 0.5g/L +蔗糖 30g/L+ 琼脂粉 7g/L(pH5.8) ；（2 ）最适侵染时间为 15 分钟。（3 ）最佳共培养时间为2d ，抗性愈伤诱导 率最高可以达到 23.5 ％。 2 、应用本研究优化的遗传转化方法，首次获得了转 Los5 、ABAR 、NCED3 、ICE1 、CBF3 基因的高羊茅和多年生黑麦草植株。通过除草剂筛选获得了 36 株独立来源的转化植株。选取部 分植株进行 PCR 检测。结果表明，外源基因已整合到转基因植株的基因组。 3、对本实验室所获得的 T1 代种子进行盆栽试验，经盐胁迫处理，检测转基因植株在不同盐 浓度条件下生理生化指标，结果表明：在盐胁迫条件下，转化株与对照株相比在脯氨酸含量、超 氧化物歧化酶活性(SOD) 、过氧化氢酶活性(POD) 、丙二醛含量、类胡萝卜素含量(Car)变化上均 出现显著差异，并随着浓度增大和时间的延长，这种差异越明显。最终表明，T1 转基因植株仍然 具有耐盐性。 4 、对种植于盐碱地上的转基因植株进行了生理生化检测及农艺性状分析。结果表明：在田 间生长的转基因植株从表型上观察和对照植株差异显著。脯氨酸含量、超氧化物歧化酶活性、过 氧化氢酶活性、丙二醛含量、质膜透性均与对照相比差异显著。 关键词：冷季型草坪草 多基因 农杆菌 遗传转化 抗盐性 II Abstract Cool-season turfgrasses were much popular to people for their long period green, high-quality lawn with landscaping and ornamental effect, and for leisure, pleasure and moderate sports. Festuca arundinaceae Schreb and Lolium pernne L. are the most widely grown cool-season turf grasses. In recent years, global water shortages, soil salinization, secondary salinization growing, many people pay attention on drought resistance, salt tolerance turf grass varieties. This can be used with a certain salt water irrigation, saving water resources. In addition, soil salinization is also very serious in China, and how to use the sali