10改善睡眠功能检验方法.docVIP

功能学评价检验方法－改善睡眠功能检验方法 1 实验动物 18-22克，每组10-15只。 2 剂量分组及受试样品给予时间 1个空白对照组和3个受试样品剂量组，根据人体每日每公斤体重推荐摄入量，扩大10倍作为小鼠实验的一个剂量组，根据受试样品的具体情况另设两个剂量组。受试样品给予时间原则上经口连续给予30天，也可根据实验需要自行设定期限。 3 实验方法 3.1 直接睡眠实验 3.1.1 3个剂量的受试样品，对照组予同体积溶剂后，是否出现睡眠现象、睡眠以翻正反射消失为指标。当小鼠置于背卧位时，能立即翻正身位如超过30-60秒不能翻正者，即认为翻正反射消失，进入睡眠。翻正反射恢复即为动物觉醒，翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间，记录空白对照组与受试样品组入睡动物数及睡眠时间。 3.1.2 F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 X2检验，四格表总例数小于40，或总例数等于或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。 3.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间实验 3.2.1 原理 3.2.2 试剂 3.2.3 操作步骤 100%入睡，但又不使睡眠时间过长的戊巴比妥钠剂量（30-60mg/kg），用此剂量正式实验。 10-15分钟，给各组动物腹腔注射戊巴比妥钠，注射量为0.2mL/20g，以翻正反射消失为指标，观察受试样品能否延长戊巴比妥钠睡眠时间。 3.2.4 F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异显显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 3.3 戊巴比妥钠（或巴比妥钠）阈下剂量催眠实验 3.3.1 原理 3.3.2 操作步骤 16-30mg/kg.bw或巴比妥钠100-150mg/kgBW），VCB 80-90%小鼠翻正反射不消失的戊巴比妥钠最大阈下剂量。动物末次给予空白对照及不同浓度受试样品后，出现峰作用前10-15分钟，各组动物腹腔注射戊巴比妥钠最大阈下催眠剂量，记录30分钟内入睡动物数（翻正反射消失达1分钟以上者）。实验宜在24-25℃安静环境下进行。 3.3.4 数据处理和结果判定 X2检验，四格表总例数小于40，或总例数等或大于40但出现理论数等于或小于1时，应改用确切概率法。 3.4 巴比妥钠睡眠潜伏期实验 3.4.1 原理 3.4.2 试剂 3.4.3 操作步骤 100%入睡，但又不使睡眠时间过长的巴比妥钠的剂量（200-300mg/kg），用此剂量正式实验。 10-20分钟后，给各组动物腹腔注射巴比妥钠，注射量为0.2mL/20g，以翻正反射消失为指标，观察受试样品对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。 3.4.4 数据处理及结果判定 F值，F值＜F0.05，结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 4 结果判定 5 注意事项 5.1 实验室环境必须安静、恒温、恒湿、以确保条件的恒定。 5.2 24-25℃为宜。 5.3 实验时应使动物在测定室适应数分钟后再进行正式测试，实验组与对照组交叉进行测试。