蒋2016秋-基因诊断与基因治疗.pptVIP

AAV载体的缺陷 AAV载体容量小，目前最多只能容纳5 kb外源DNA片段； 感染效率比反转录病毒载体低, 在40%~80%的成人中存在过感染; 可能会引起免疫排斥。 常用基因治疗载体 ? 整合 致病性 感染细胞 克隆容量 反转录病毒 载体 随机整合，效率高 可能致病 分裂细胞 7kb 腺病毒载体 不整合，可能丢失 不致病 分裂细胞、非分裂细胞 ? 腺相关病毒载体 定点整合(19号染色体特定区域) 不致病 分裂细胞、非分裂细胞 5kb 7.5kb 成功用于基因治疗的靶细胞 靶 细 胞 优 点 缺 点 造血干细胞 自我更新能力和分化能力。最有前途的靶细胞之一。 骨髓中含量低，难以获得足够的量 皮肤成纤维细胞 来源广，易扩增培养，易于移植。 可以稳定表达一段时间 肌细胞 易于吸收，肌细胞内的溶酶体和DNA酶含量很低。适合DNA疫苗治疗。 ? 体细胞 （包括：病变组织细胞 正常的免疫功能细胞） （三）选择基因治疗的靶细胞 治疗基因导入病人体内的方式 体内疗法 in vivo 将治疗载体直接导入体内有关的组织,使其进入细胞并表达. 体外疗法 ex vivo 先靶细胞从体内取出,将治疗载体导入细胞,筛选,再回输到体内有关组织. （四）将治疗基因导入人体 基因导入细胞的方法：生物学（病毒感染）  和非生物学 非病毒导入法 物理方法 直接注射 将裸DNA（质粒）直接注射入肌肉组织 基因枪法 又称为生物弹道技术 电穿孔法 化学方法 磷酸钙共沉淀法 脂质体转染法 DEAE葡聚糖法 （五）治疗基因表达的检测 检测DNA 检测RNA 检测蛋白质 （一）、恶性肿瘤 （二）、心脑血管性疾病 （三）、遗传性疾病 （四）、艾滋病 三、基因治疗的临床应用现状 遗传性疾病 腺苷脱氨酶（ADA）缺陷病 病 因 ADA缺陷→重症联合免疫缺陷症 （SCID） 治疗靶细胞 骨髓干细胞?? 治疗载体 逆转录病毒 人类历史上第一种应用基因治疗的疾病 1. 单基因遗传病的基因治疗 只受一对等位基因影响而发生的疾病属于单基因遗传病，设计基因治疗方案相对容易，例如镰刀状红细胞性贫血、α-地中海贫血、血友病等。基本方案是通过一定的方法把正常的基因导入到病人体内，表达出正常的功能蛋白。 2.针对多基因病的基因治疗 由多个基因相互作用结果，并受环境因素影响而发生的疾病属于多基因病，如高血压、动脉粥样硬化、糖尿病、肿瘤等。 恶性肿瘤 恶性肿瘤的基因治疗包括：针对癌基因表达的各种基因沉默、针对抑癌基因的基因增补、针对肿瘤免疫反应的细胞因子基因导入和针对肿瘤血管生成的基因失活等等。 展望 从实验室到临床,逐步走向成熟,是一个极有希望和发展前景的领域 存在的问题 缺乏高效特异的基因导入系统 缺乏调控基因表达的方式 Listed here are the steps involved in performing the Livak relative quantification analysis. In the first step, the Ct values of the target gene samples and the housekeeping gene samples are determined. The Ct value of the target sample is then normalized to that of the housekeeping gene using the formula ….. Ct target minus Ct housekeeping. The average ?Ct is calculated for replicates in the second step. In the third step, a calibrator is chosen from among the samples and the calibrated Ct value (which is also called the delta delta Ct value) is determined for the target using the formula ….. normalized