GoldScriptcDNA合成试剂盒.PDF

GoldScript cDNA 合成试剂盒 货号： 规格：50 次反应 保存：-20℃ 产品描述 GoldScript cDNA 合成试剂盒是为从纯化的 mRNA 或总 RNA 合成第一链 cDNA 而优化设计的，总RNA的使用量可以为 1ng 5µg。cDNA 合成之后，无需有机物抽提或乙醇沉淀，即可用特异引物进行 PCR 扩增。 第一链 cDNA 合成反应是由 GoldScript 逆转录酶 (RT) 催化的。此酶经过改造，降低了 RNaseH 活性，从而能够产生更多的 全长 cDNA ，并且获得的第一链 cDNA 的产量比其它逆转录酶更高。由于 rRNA 和 tRNA 对 GoldScript 逆转录酶的抑制作用 不明显，所以它能从总 RNA 中高效合成第一链 cDNA。这种酶的热稳定性强，最高能在 50℃ 合成 cDNA。 本试剂盒经过优化，能从不同浓度的起始模板中合成第一链 cDNA。在优化过程中，降低了 GoldScript 逆转录酶的浓度，并 且添加了重组的 RNase 抑制剂。另外，通过反应条件的优化进一步提高了系统的灵敏度。 应用本试剂盒，可以采用 Oligo (dT) ，随机引物，或基因特异引物三种方法对总 RNA 或 mRNA 进行第一链合成。然后用目 的基因特异的引物进行 PCR 反应。 试剂盒组分 其它仪器及试剂 下面这些仪器及试剂材料需要客户提供： 组分 量 · 总 RNA 或mRNA Oligo (dT) 12-18 (0.5µg/µl) 50 µl · 可选：扩增纯 DNaseI 随机引物 (50ng/µl) 250 µl · PCR 所需的 DNA 聚合酶 10X RT buffer [200mMTris-HCl 1 ml · PCR 仪 (pH8.4), 500mM KCl] · 高压灭菌的 0.2ml 或 0.5ml 微量离心管或高压灭菌的 25mM MgCl2 500 µl 薄壁 PCR 管 0.1M DTT 250 µl · 1-20µl ，20-200µl 移液器及吸头 · 一次性手套 10mM dNTP mix 250 µl (10mM each dATP,dCTP,dGTP,dTTP) · 扩增目的 mRNA 片段的特异引物 · 微型离心机，最大相对离心力应能达到 14,000×g GoldScript 逆转录酶 (50units/µl) 50 ml · 37℃ 、42℃ 、65℃ 和 70℃ 水浴锅或加热块 重组 RNA 酶抑制剂 (40units/µl) 100 µl E. coli RNaseH (2units/µl) 50 µl DEPC - 水 1.2 ml 对照 RNA (50ng/µl) 15 µl 对照引物 A (10µM) 20 µl 对照引物 B (10µM) 20 µl 应用 Oligo(dT) 或 GSP 引物启动第一链 cDNA 的合成