强直性脊柱炎的实验室检测及其意义-培训课件.pptVIP

* 连锁不平衡：不同座位上等位基因连锁状态的描述，指这些等位基因在同一条染色体上出现的频率大于随机组合的预期值。 * 各方法敏感性 * 此法最为传统和常用 * TMB 四甲基联苯胺 * 强直性脊柱炎的实验室检测及其意义 四川金域 魏徵霄 2014-02-08 内容提要： 强直性脊柱炎 特点及其与B27关系 什么是HLA及HLA-B27 MHC、HLA、亚型、关联、RR HLA-B27与哪些疾病相关 HLA-B27 怎么检测 MLCT、ELISA、IMS-ELISA、FCM、PCR-SSP * *  强直性脊柱炎(AS) 是一种慢性、进行性，中轴关节受累 的关节病变，其中以骶髂关节和脊柱关节受累为主要临床表现。该病早期进展较慢，但后期发展较快，很短时间内形成 驼背畸形，髋、膝等关节强直，故早期诊断显得尤为重要。 * 强直性脊柱炎的流行病学 患病率 我国0.3% 高！ （RA 0.36%） 发病年龄 40岁以前发病 高峰20-30 岁 男女比例 10:1 强直性脊柱炎相关检测：HLA-B27 Ankylosing Spondylitis，AS 患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向； 主要侵犯：中轴关节（骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织） 可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直 B27检测可作为有相关症状或高危人群AS早期的筛选方法！ AS不是RA的一种特殊类型！ * 强直性脊柱炎 类风湿性关节炎 地区分布 种族差异大 世界性 性别分布 男＞女 女＞男 年龄 20-30 30-50 家族史 明显 不明显 类风湿因子 （－） （?） AS与HLA-B27 * 健康人群HLA-B27阳性率及AS患病率各地区、种族有显著的差异 HLA—B27与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性 两种错误认识：HLA-B27阳性≠AS！ HLA-B27阳性不会转阴！ HLA-B27阳性率 AS患病率 AS患者B27阳性率 中国人 2-7% 0.3% 90～95% 欧洲白种人 4～13％ 1％ 80～100% 南非黑人 1％ 很低 22% 美国黑人 2～4％ 57% 印地安人 9～50％ 6～12％ 80～100% AS与HLA-B27的关联机制 连锁不平衡学说 分子模拟学说 关节源性肽假说 其他：T细胞受体库假说超抗原假说B27修饰因子假说Cys67模型 * HLA相关概念 主要组织相容性抗原 主要组织相容性复合体（ MHC ⅠⅡⅢ类)：H-2 SLA HLA MHC、HLA复合体……基因 MHC分子、HLA分子……抗原 HLA：人类白细胞抗原（ Human Leukocyte Antigen） * HLA相关概念 * 不同地区HLA-B27亚型的流行病学分布 欧洲、非洲 2705、2702、2707 东南亚（印尼、马来西亚、泰国） 2706、2704、2705 中国、新加坡、日本 2704、2705、2707 HLA-B27相关疾病 * 疾病 HLA-B27阳性率(%) 强直性脊椎炎 90 银屑病性关节炎 ? 55 Reiter’s综合症 37 反应性关节炎 沙门氏菌感染 29.7 志贺氏菌感染 20.7 耶尔森氏菌感染 17.6 淋病双球菌感染 14.0 正常人群 ? 2～7 HLA-B27检测方法及评价 抗原水平 微量细胞毒法 84% ELISA 85% IMS-ELISA 88% 流式细胞术法 93% 基因水平 PCR-SSP 96% * 微量细胞毒法（microlymphocytotoxic test，MLCT） 原理：如果受试者淋巴细胞表面表达有相应的HLA-B27抗原，就可以与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞表面是否存在HLA-B27抗原及其与抗体的反应强度。 优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。 缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜表面的B27分子的数量或结构改变，影响MLCT的结果，易出现假阴性。 * J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189 ELISA 原理：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中HLA-B27水平。用纯化的B27抗体包被微孔板，依次加入HL