1，6二磷酸果糖预处理对家兔急性肾缺血再灌注损伤的保护作用论文.docVIP

　　1，6二磷酸果糖预处理对家兔急性肾缺血再灌注损伤的保护作用论文 刘行海 买文丽 刘红 郑倩 敬华娥 易志刚 【摘要】 目的：观察1，6二磷酸果糖(FDP)预处理对急性肾缺血再灌注损伤的保护作用。方法：新西兰大白兔27只，随机均分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)、1，6二磷酸果糖预处理组(F组)。采用左肾切除右肾动静脉夹闭60min再灌注180min致肾损伤的模型，术前连续4d给予FDP。缺血再灌注180min后分别检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肾组织丙二醛(MDA)水平及超氧化物岐化酶(SOD)活性，观察肾组织的病理变化及肾小管计分，并对3组进行比较。结果：与S组比较，I组的Scr、BUN、MDA水平明显升高(P 0.05).freelia/Reperfusion,I/R)损伤导致的急性肾功能衰竭在临床上具有很高的发病率和死亡率。因此，如何减轻或避免肾缺血再灌注损伤一直是临床和基础实验研究的重点。1,6二磷酸果糖(FDP)作为糖酵解中高能中间代谢产物，近年研究发现其对心脏、脑、小肠等器官的缺血再灌注损伤有较好的防治效果1-3，但关于FDP在肾I/R损伤方面的研究较少。本实验通过建立兔肾缺血60min再灌注180min致肾I/R损伤模型，探讨FDP对兔急性I/R损伤的保护作用。 1 材料和方法 1.1 药物和试剂 FDP由山东新华制药股份有限公司提供，产品批号：0906030。血尿肌酐、尿素氮、SOD和MDA测定试剂盒由南京建成生物工程有限公司提供产品批号 1.2 动物分组及术前处理 健康雄性新西兰大白兔27只，本院实验动物中心提供，6月龄，体质量2.5±0.28kg，雌雄不拘，随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(I组)和1,6二磷酸果糖预处理组(F组)，每组9只，置空调室常规喂养。术前4d每天1次，F组于耳缘静脉缓慢输注1，6二磷酸果糖(用生理盐水稀释成每ml含FDP为50mg，100mg·kg-1)。S组和I组均仅用2ml·kg-1生理盐水。 1.3 肾脏缺血再灌注模型的复制 1%戊巴比妥钠溶液(3ml·kg-1，iv)，麻醉兔。腹中线切口，去左肾。分离右肾动、静脉并夹闭，60min后恢复灌流，观察肾脏颜色变化，确定血流5min之内恢复，关闭腹腔再灌注180min时取右肾。假手术组开腹后仅行左肾切除，右肾蒂游离。 1.4 标本采集及观察指标 于实验结束时心脏取血，测定血清尿素氮(BUN)和血清肌酐(Cr)含量。右肾标本用4℃冷生理盐水冲洗去血液，剪下肾下极组织滤纸吸干，随即称取0.5g加4℃生理盐水4.5ml，用玻璃匀浆器制成10%的组织匀浆，采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，以TBA比色法测定MDA含量。同时摘取部分右肾组织置于10%中性甲醛溶液中固定24h后常规石蜡包埋，按病理学常规制片HE染色，光学显微镜观察肾组织病理变化和肾小管评分。根据Jablonski等4制定的肾脏近曲小管坏死程度分级标准分为5级：0级为正常;1级为单个细胞的坏死伴核分裂;2级为相邻近曲小管所有细胞的坏死，但周围小管存活;3级为限定于近曲小管远端1/3细胞的坏死并扩展到皮质和髓质交界处;4级近曲小管整段坏死。 1.5 统计学分析 应用SPSS 13.0统计软件进行处理，计量资料以x±s表示，采用方差分析，P 0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 肾脏功能的测定 与S组比较，I组和F组血清Cr、BUN水平均升高(P 0.05)，而F组低于I组(P 0.01)，见表1。表1 血清中Scr、BUN含量的变化 2.2 肾组织MDA含量、SOD活性的变化 与S组比较,I组和F组再灌注后肾组织SOD活性均降低、MDA含量均升高(P 0.01);而F组SOD、MDA分别高于和低于I组(P 0.05)，见表2。 2.3 肾组织病理学改变 光镜下观察：S组兔肾组织结构基本正常;I组大部分肾小管上皮细胞出现程度较重的肿胀及不同程度坏死，肾间质局部出血水肿及明显炎性细胞浸润;F组仅见部分肾小管上皮细胞轻度肿胀，少量变性与坏死，肾间质局部轻度出血水肿及炎性细胞浸润。F组肾小管计分明显低于I组(P 0.05)，见表3。表2 肾组织中SOD活性、MDA含量的变化表3 肾小管计分的变 3 讨论 缺血再灌注损伤是缺血性急性肾功能衰竭的重要损伤环节，也是肾移植中影响移植肾早期功能恢复的主要因素。现已公认肾脏I/R损伤与活性氧自由基的产生密切相关5。FDP作为糖酵解的中间产物，近年来发现其对心脏、脑、小肠、肝等组织器官缺血再灌注损伤有较好的保护作用。研究表明FDP可保护心肌的SOD活性，增强心肌清除超氧阴离子的能力，从而减少心肌细胞生成过氧亚硝酸阴离子6。Markov等的实验结果