Cyclin D1在口腔癌中的表达与肿瘤生长率及预后的关系论文.docVIP

　　Cyclin D1在口腔癌中的表达与肿瘤生长率及预后的关系论文 李立 刘义 吴科锋 吕应年 【摘要】 目的 调查Cyclin D1表达与口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)肿瘤生长率及临床预后之间的关系。方法 来源于外科手术的诊断用组织切片接受了Cyclin D1蛋白免疫组化染色，并实施Ki67染色用以定量癌组织肿瘤生长率。结果 Cyclin D1表达于24例新辅助化疗组病例中的22例(91.7%)及24例单纯外科手术组病例中的23例(95.8%)。染色密度既与淋巴结转移无关，也与Ki67表达无关。KaplanMeier分析显示在Cyclin D1表达与新辅助化疗病例及单纯外科手术病例的总生存率之间存在密切关系(P＜0.05,P＜0.001)。结论 Cyclin D1在OSCC中具有预后意义。 【关键词】 PICC； 肠癌化疗 头颈部鳞癌最重要的预后判断因素为TNM分期，而淋巴结转移最为关键〔1〕。可是，由于肿瘤的生物学特性经常变化从而导致了尽管分期相同但临床疾病过程趋异。因此，近年来鉴别与临床进展相关的分子及生物预后因子的研究已被广泛开展。Cyclin D1作为调控细胞周期的分子标志物，常在头颈部鳞癌中过表达.freel(CDDP)或5FU。化疗结束4～6 厚切片。 1.2 试剂 鼠抗人Cyclin D1单克隆抗体购自德国IBL公司，鼠抗人Ki67单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，二抗为抗鼠抗体及ABC试剂盒购自丹麦DAKO公司。 1.3 免疫组化 切片脱蜡后浸于0.01 mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)内，微波炉加热至沸腾，并保持该状态15 min修复抗原；切片冷却后，浸于含0.3%H2O2的甲醇中灭活内源性过氧化物酶；PBS洗涤，2.5％脱脂乳封闭后不洗，滴加鼠抗人Cyclin D1单克隆抗体(1∶500)，4℃过夜；PBS洗涤，加生物素标记二抗(1∶100)，室温下反应2 h； PBS洗涤，滴加ABC试剂，室温下反应50 min；PBS洗涤，DAB显色，苏木精轻染，二甲苯透明，封片。Cyclin D1染色后，另取切片以同样方法对Ki67蛋白进行染色，Ki67抗体稀释倍数为1∶100。 1.4 结果判定 在200倍镜下，每张切片选4处不同视野，辨别阳性细胞与阴性细胞。Cyclin D1表达阳性的细胞占肿瘤细胞总数的百分比定义为Cyclin D1标记指数(labeling index，LI)，同样Ki67表达阳性的细胞占肿瘤细胞总数的百分比定义为Ki67 LI。 1.5 统计学处理 采用SPSS 12.0软件系统的成组t检验、Pearson相关分析、 χ2检验及KaplanMeier法Log Rank检验。 2 结果 2.1 Cyclin D1在OSCC手术切除癌组织内的表达 在癌组织，Cyclin D1表达阳性的细胞核被染成棕黄色(图1)。24例新辅助化疗者中有22例Cyclin D1表达阳性，阳性表达率为91.7%，平均Cyclin D1 LI为10.3%±10.6%；24例单纯外科手术病例中有23例Cyclin D1表达阳性，阳性表达率为95.8%，平均Cyclin D1 LI为10.5%±10.6%。在两种治疗方法间，Cyclin D1表达无显著差异(P＞0.05)。 2.2 Ki67在OSCC手术切除癌组织内的表达 在癌组织，Ki67表达阳性的细胞核为棕黄色(图1)。48例OSCC内均有Ki67表达，阳性表达率为100%。24例新辅助化疗者平均Ki67 LI为41.2%±15.6%；24例单纯外科手术病例则为48%±16.1%。在两种治疗方法间，Ki67表达无显著差异(P＞0.05)。 2.3 在OSCC内Cyclin D1 LI与Ki67 LI所代表的肿瘤生长率之间的相关性 无论是在新辅助化疗病例手术切除癌组织内还是单纯外科手术病例手术切除癌组织内，Cyclin D1 LI与Ki67 LI间均不存在相关性(r=-0.01，P＞0.05；r=-0.121，P＞0.05)。 2.4 Cyclin D1与OSCC淋巴结转移之间的关系 在新辅助化疗组，以该组Cyclin D1 LI平均值为分割点，未确认到高于该值者与低于该值者在淋巴结转移上存在差异(P＞0.05)；同样，在单纯外科手术组也未确认到Cyclin D1表达与淋巴结转移有关(P＞0.05)。 2.5 Cyclin D1与OSCC患者5年生存之间的关系 无论是在新辅助化疗组还是在单纯外科手术组，分别以两组Cyclin D1 LI平均值为分割点，均发现低于平均值者术后生存更佳(P＜0.05；P＜0.001)(图2)。