CYP1A1-2A基因多态性与宁夏汉族乳腺癌遗传易感性研究论文.docVIP

　　CYP1A1*2A基因多态性与宁夏汉族乳腺癌遗传易感性研究论文 郭卫东，饶宁莲，刘春莲，赵巍，，霍正浩，彭亮，陈银涛.freelorphism and Susceptibility to Breast Cancer in the Han Nationality in Ningxia Abstract: ［Purpose］ To investigate the association betorphism and its susceptibility to breast cancer in the Han nationality in Ningxia. ［Methods］ CYP1A1 *2A gene polymorphism in 144 cases ozygote CC orphism is linked ozygote and heterozygote might increase risk for breast cancer, but s; cytochrome P450 1A1*2A; gene polymorphism; Ningxia; Han population 目前已确认的乳腺癌危险因素只能解释30%～40%的发病原因1。除家族性乳腺癌主要与BRCA1、BRCA2有关外，散发性乳腺癌的发生可能与环境致癌物的代谢有关。个体之间的患癌差异性被称为肿瘤遗传易感性。研究表明Ⅰ相与Ⅱ相代谢酶基因多态性与个体肿瘤易感性差异有关。CYP1A1是体内重要的Ⅰ相代谢解毒酶之一，能代谢活化多种环境致癌物或致突变物2，国外报道显示其遗传多态性与乳腺癌的易感性有关3。本研究对144例乳腺癌患者和154例对照的细胞色素P450 1A1（CYP1A1）基因3′端*2A多态性的分析，探讨CYP1A1*2A基因多态性与宁夏汉族乳腺癌易感性的相关性。 1 材料与方法 1.1 研究对象 于2005年5月～2006年8月，收集经宁夏医学院第一附属医院临床病理检查确诊的女性乳腺癌患者144例，年龄28~75岁，平均年龄52.27岁；来自该院的健康体检女性对照者154例，年龄30~70岁，平均年龄52.69岁。所有研究对象均无乳腺炎等乳腺疾病史、无放射和化学药物治疗史、无自身免疫性疾病史；两组研究对象均为在宁夏地区生活15年以上且无血缘关系的汉族居民。以上研究对象为排除PCR扩增失败的样本。 1.2 实验方法 1.2.1 提取外周血DNA 抽取静脉血3～5ml，EDTA抗凝，低渗溶血法分离白细胞,酚、氯仿法提取基因组DNA，并用乙醇沉淀，溶解于保存液(TAE)中(浓度为0.1mg/L)，置-4℃冰箱保存。 1.2.2 CYP1A1基因多态性检测 引物设计：引物3由北京赛百盛技术有限公司合成。上游：5′-TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT-3′，下游：5′-AGCGGCTACACCTCTTCACTG-3′。上下游引物（各5OD）分别加去离子水228.8μl及262.6μl配置成1μl/L备用。 PCR扩增：体系总体积为25μl，包括10pmol/μl的引物溶液各1.25μl，4×dNTP(含各种dNTP2.5mmol/L)溶液2.0μl，10×Buffer 2.0μl，25mmol/L MgCl2溶液1μl，Tag酶1U（购自华美生物工程公司），基因组DNA溶液2.0μl，再加去离子水至25μl配成反应体系。 应用Bio-Rad公司的PE2400PCR仪进行基因扩增。反应条件为94℃预变性5min，循环周期依次为解链94℃35s，退火60℃35s，延伸72℃60s，33个循环周期后72℃再延伸7min。1%琼脂糖凝胶电泳，检查聚合酶链反应（PCR）扩增产物，扩增片段大小为343bp。PCR扩增产物置-4℃冰箱保存待用。 酶切与电泳：PCR扩增产物10μl，MspⅠ(Promega) 0.5μl(10U)，10×Buffer 2.0μl，BSA 2.0μl，用去离子水补足至20μl，37℃水浴，转摇40转，消化4h。2%琼脂糖凝胶电泳40min。 酶切结果经电泳后，于紫外灯下判定其基因型，CYP1A1*2A野生型（TT）显示为343bp一条带；杂合突变型（TC）为343bp、200bp、143bp三条带；纯合突变型（CC）为200bp、143bp两条带。另取TT和CC的PCR扩增样本数例送测序，检验基因分型的准确性。 1.3 统计学处理 采用SPSS11.5软件对所得数据进行统计分析。测得的基因型、等位基因频率与Hardy-spⅠ识别的酶切位点。3种基因型在不同人群中的分布表现出较大的差异。在亚洲人群基因型CC和基因型TC频率分别是2%～18%和32%～55%，而在欧洲和美洲白种人群两种基因型的频率则分别是