CYP2C9、GST M1基因多态性与肺癌易感性的关系论文.docVIP

　　CYP2C9、GST M1基因多态性与肺癌易感性的关系论文 王启明，卢桥发，甄海宁，鲍敏，张焕景 【摘要】 目的 探讨细胞色素P450 2C9（CYP2C9）基因、谷胱甘肽硫转移酶M1(GST M1)基因多态性与肺癌易感性的关系。方法 用PCRRFLP法分析56例肺癌（简称肺癌组）和42例健康对照组NsiⅠ识别的CYP2C9基因型；用PCR法分析其GST M1基因型。结果 突变型CYP2C9*3型基因发生频率在肺癌组中为8.93%，高于对照组的4.76%，其差异无显著性(P 0.05)。肺癌组GST M1基因缺失型〔GST M1（-）〕发生率为71.43%，高于对照组的45.24%.freelorphism and Lung Cancer Susceptibility Abstract：Objective To evaluate the relationship betorlism and susceptibility of lung cancer.Methods The polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphlism (PCRRFLP) utation genotype of CYP2C9*3 ore mon among patients oking (81.08%)oking too(52.18%,P 0.05).Conclusions There utation genotype of CYP2C9*3 and lung cancer, ent of lung cancer.And smoking might elevate the risk of lung cancer for the individuals orlism; Lung cancer 0 引言 大量动物实验和流行病学研究表明,大气污染、吸烟、职业接触致癌物是肺癌的主要致病因素,其中最主要的化学致癌物为多环芳烃(polycyclic aromatic carbons, PAHs)。化学致癌物经过Ⅰ相酶代谢，如细胞色素P450(CYP)酶体系活化成他们的终形式。这些终形式又经过Ⅱ相酶，如谷胱甘肽硫转移酶（GSTs）的作用成为亲水性的物质而失去活性。可见，肺癌的发生可能取决于Ⅰ相酶和Ⅱ相酶在机体内的平衡。GSTM1酶是Ⅱ相酶的重要成员，其空白基因型（GST M1(-)基因型）与多种肿瘤的易感性有关［1］。为此，我们对56例肺癌患者及42例正常对照组的CYP2C9和GST M1的基因多态性进行了检测，观察两种基因多态性的分布状况，以探讨肺癌的遗传易感性因素。 1 资料和方法 1.1 研究对象 选择具有细胞学和/或病理学诊断的肺癌56例为暴露组（简称肺癌组），其年龄64.86±12.53岁，工龄31.93±8.17年，男性50例，女性6例； 选择同一地区健康体检者42例为对照, 年龄59.12±12.51岁，工龄28.54±12.10年，男性38例，女性4例。调查对象抽取静脉血3ml，EDTA抗凝。 1.2 检测方法 1.2.1 CYP2C9*3型基因的检测(PCRRFLP法) P1选择人CYP2C9 基因DNA序列第7外显子的第151bp～182bp位的 32个碱基设计, 序列为cag atg ctg tgg tgc acg agg tcc aga gat gc; P2选择第296bp～320bp位的25个碱基设计, 序列为aat gat act atg aat ttg gga ctt c。扩增长度为170bp。检测CYP2C9*3型基因PCR反应总体积50μl，97℃ 预变性10min，94℃变性30s，59℃退火30s，72℃延伸45s，循环35次，最后72℃延伸7min。CYP2C9*3型基因PCR产物纯化后取5μg加入限制性内切酶NsiⅠ1μl，37℃消化3h； 3.0%琼脂糖中电泳(70V，1h)后，在图象分析仪内观察，记录并拍照。野生型CYP2C9*3基因经过NsiⅠ酶切后产生140bp和30bp两个基因片段，突变型则不能被切开，见图1。 1道：100bp DNA-ladder；3道：突变型CYP2C9*3基因；2、4、5、6、7、8、9道：野生型CYP2C9*3基因 图1 CYP2C9*3型基因酶切电泳图谱（略） 1.2.2 GST M1基因检测(PCR法) 在GST M1基因第6、7外显子上设计一对引物(P3，P4)。P3序列为gaa ctc cct gaa aag cta aag c; P4序列为gtt ggg ctc aaa tat acg gtg g。扩增长度为215bp。 扩增GST M1基因PCR反应总体积50