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FAK的阻断对MHCC97肝癌细胞侵袭性的影响论文.doc
FAK的阻断对MHCC97肝癌细胞侵袭性的影响论文
.freela cells.Methods Oligofec TAMINE-mediated antisense FAK ODN a cells.The invasive activity of tumor cells ber has been dealed .Results Antisense FAK ODN and Genistein can both decrease the invasion of MHCC97 hepatocellular carcinoma cells.Conclusion Inhibition of FAK expression can inhibit the invasion ability of MHCC97 hepatocellular carcinoma cells.
【Key a cell；invasion
肝癌严重威胁着人类的健康，在中国肝癌的发病率一直呈逐年上升趋势。我国每年约11万人死于肝癌.freela公司。Matrigel胶购于BD Biosciences公司。
1.2 Oligofec TAMINE 介导的反义FAK ODN 转染 反义FAK ODN 5’-ATAATCCAGCTTGAACCAAG-3’。由上海生工生物工程公司DNA合成，全硫代修饰，聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化，冻存。Oligofec TAMINE按产品说明书介导转染培养细胞。对照组只加入脂质体不加入反义FAK ODN。
1.3 Genistein抑制FAK磷酸化 以10μg/ml的终浓度加入细胞培养液中，并使DMSO终浓度为0.4%。实验对照组以同样终浓度为0.4%的溶剂处理。
1.4 细胞体外侵袭能力检测法 Trans孔径）黏附于Transl，加入滤膜上表面（5μg/滤膜），室温下通风橱中干燥过夜。用前Matrigel以40μl无血清培养基重建20min后备用。将行不同预处理后的细胞用无血清培养基洗3次，0.25%胰蛋白酶消化，重悬于含0.1%BSA的培养基中，取2×106/ml细胞100μl加入至上室，600μl 0.1%小牛血清培养基加入下室。37℃、5%CO2条件下培养20h后，滤膜用甲醇固定5min，行Gimsa染色。去除滤膜上层细胞，显微镜下（×320）计数滤膜下表面细胞数，随机计数5个视野中的细胞数目，每个标本重复2次，实验重复2次，以侵袭细胞的相对数目来表示肿瘤细胞的侵袭能力。
1.5 统计学方法 采用t检验。
2 结果
我们发现转染反义FAK ODN和经Genistein处理后的MHCC97肝癌细胞穿透Matrigel胶处理后的Transamoto H，Itoh F，Adachi Y，et al.Relation of enhanced secretion of active matrix，metalloproteinases or spread in human hepatocellular carcinoma.Gastroenterology，1997，112：1290-1296.
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