L┐NAME对新生鼠缺氧性脑损伤内源性NO和ET的影响论文.docVIP

　　L┐NAME对新生鼠缺氧性脑损伤内源性NO和ET的影响论文 .freeling the effect of Nω -nitro-L-arginine methyl ester（L-NAME），an inhibitor of nitric oxide synthase（NOS），on brain NO production and serum ET level in neal control group，hypoxia group and L-NAME+hypoxia group.The ET level in serum，NO pro-duction，NOS activity，pathology and capillary perfusion in brain ET level of hypoxia group ore serious in hypoxia group that that in controls.pared ET level of L-NAME+hypoxia group al increase of serum ET in early phase of acute hypoxia is the main factor of brain in-jury;NOS inhibitor L-NAME may make microcirculation dysfunction ic brain injury. 0 引言 一氧化氮（NO）和内皮素（ET）在围产期窒息时两者均升高，但它们在窒息后脑损伤中的作用及应用NO合成酶抑制剂的利弊尚存在争论.我们应用NO合成酶抑制剂L-硝基-精氨酸甲酯（L-NAME）对围产期窒息动物模型进行预处理，观察缺氧后内源性NO和ET的含量变化及其与脑组织病理和微循环变化的关系，从而探讨两者在早期缺氧性脑损伤中的作用地位及应用L-NAME的利弊. 1 材料和方法 1.1 材料 新生10d的SD大鼠（体质量18～24g），由本校实验动物中心提供;L-NAME由Sigma公司生产;ET试剂盒购自北京东亚免疫技术研究所;NO试剂盒购自南京建成生物工程研究所;NOS试剂盒购自郑州中亚生物工程公司. 1.2 方法 1.2.1 缺氧动物模型制备［1］ 将正常分娩的新生10d的SD大鼠30只随机分为正常对照组、缺氧组及L-NAME组各10只.L-NAME组ip L-NAME3mg kg-1 ，另两组分别ip相同剂量的无菌生理盐水，1h时后将缺氧组及L-NAME组置于有机玻璃缺氧房内，按一定比例输入O2 和N2 ，监控仪控制氧浓度在7%，房内温度24℃，缺氧时间持续1h.4h后各组大鼠断颈取血1mL加入抗凝管，4℃3000r min-1 离心20min，取血浆置-20℃冰箱，用于检测血浆ET水平，然后断头处死动物，立即取出脑组织备用. 1.2.2 血浆ET浓度检测 采用放射免疫分析法测定，用γ计数检测仪按药盒说明书测定放射活性. 1.2.3 脑NOS活性及NO含量测定 将脑组织精确称质量，在冰浴中按质量比1 9加入4℃生理盐水，玻璃匀浆器在冰水中匀浆，然后4℃3000r min-1 离心10min，取上清液用分光光度法测NO含量和NOS活性.NOS活性定义为每分钟克组织蛋白产生1nmol NO为1000个活性单位（×10 3 U g-1 min-1 ）.组织蛋白含量测定用双缩脲法. 1.2.4 脑组织病理检查 大脑皮层组织标本用40g L-1 甲醛固定、石蜡包埋后，切片，常规HE染色，光镜下观察脑组织病理变化;在脑冠状切面上，对毛细血管充盈不良程度进行分级［2］ :Ⅰ级偶见皮质辐射状毛细血管不充盈;Ⅱ级皮质或（和）皮质下小区域不充盈;Ⅲ级皮质与皮质下交界区不充盈;Ⅳ级皮质下和 基底神经节广泛灌注不良. 统计学处理:所有数据用x ±s表示，各组数据间的差异，采用F检验;毛细血管充盈不良程度用每一级的例数表示，并用Ridit分析进行比较. 2 结果 2.1 大鼠血浆ET及脑NO含量和NOS活性的变化 缺氧组新生大鼠血浆ET水平较正常对照组显著升高（P 0.01），而脑NO含量及NOS活性较正常对照组无显著改变（P 0.05）;L-NAME预处理组，血浆ET水平与缺氧组相比显著升高（P 0.05），脑NO含量及NOS活性较缺氧组显著降低（P 0.05～0.01，Tab1）.表1 各组新生大鼠血浆ET及脑NO含量和NOS活性（略） 2.2 脑组织病理改变 正常对照组大鼠脑组织光镜下显示细胞形态结构基本正常;缺氧组光镜下可见脑组织细胞肿胀及间质水肿，并有少许炎细胞浸润，大脑皮层散在点状出血灶;L-NAME组亦表现为脑组