MAL基因在原发食管癌组织表达及临床意义论文.docVIP

　　MAL基因在原发食管癌组织表达及临床意义论文 【摘要】 目的 探讨MAL基因表达下调与食管癌病理分期、组织学分级的相关性。方法 采用RT-PCR和半定量RT-PCR方法检测45例食管癌组织和癌旁食管黏膜组织中MAL基因的表达。结果 40例食管癌组织中MAL mRNA表达明显低于相应的癌旁食管黏膜组织(χ2=30.59,P 0.01)；Ⅰ～Ⅱ期病人的MAL基因表达水平显著高于Ⅲ期病人（t=5.952，P 0.001），淋巴结转移阳性病人MAL mRNA表达水平显著低于淋巴结转移阴性病人（t=6.743，P 0.001）。结论 MAL mRNA在食管癌组织中的表达与临床分期、组织学分级等临床病理因素有一定相关性，可作为判断食管癌恶性程度、转移潜能及预后的实验室指标。 【关键词】 食管肿瘤;MAL基因；逆转录聚合酶链反应 ［ABSTRACT］ Objective To explore the relevance beti-quantitative RT-PCR technique. Results The mRNA expression of MAL in 40 cancer tissue samples ucous membrane (χ2=30.59,P 0.01). The gene expression in stages Ⅰ and Ⅱ patients ph node metastasis shoining tumor malignancy and predicting its prognosis. ［KEY AL gene; Reverse transcriptase polymerase chain reaction MAL基因是由ALONSO等［1］于1987年分离得到的抑制肿瘤生长的新基因，MAL基因失活及异常与细胞信号转导、肿瘤的发生发展和临床预后等有一定关系。近年来，MAL基因与食管癌的关系已成为研究的热点。本研究利用定性和半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测食管癌组织及其癌旁组织中MAL基因的表达情况，旨在探讨MAL基因在食管癌发生发展过程中的作用.freel3癌组织及5 cm外癌旁组织，标本30 min内送实验室，新鲜提取总RNA；不能保证30 min内制备样品的，在取材后放-80 ℃冰箱保存备测。 1.2 检测方法 采用半定量RT-PCR法检测MAL mRNA的相对表达水平。①总RNA提取：采用Trizol提取总RNA，并进行纯度和浓度测定。②RT反应:于DEPC处理的Eppendorf管中，加入1 μg总RNA、MMLV及随机引物等，快速离心混匀后，37 ℃ 1 h，95 ℃ 10 min灭活MMLV，快速离心使蒸气沉于管底。③PCR反应：于0.5 mL Eppendorf管中加入RT反应产物、PCR反应体系、MAL上游引物（5′-AAGATCCTCTGCTGACCCCT-3′）、MAL下游引物(5′-ACCATGGACCTCTGGAAAGA-3′)、β-actin上游引物(5′-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3′)，以及β-actin下游引物(5′-CTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3′)，扩增片段长度为500 bp；95 ℃ 5 min，离心使蒸气沉于管底，加Taq DNA聚合酶，快速离心混匀。循环条件：94 ℃ 1 min，58 ℃1 min，72 ℃ 1 min，循环35次，末次延伸7 min。电泳鉴定，观察目的基因，实验中仅出现一条500 bp β-actin条带为MAL mRNA阴性；同时出现166 bp条带为MAL mRNA阳性。采用数字图像分析仪2200系统观察拍照并进行半定量分析，以MAL／β-actin比值作为MAL mRNA相对表达量，若比值小于25％为表达缺失，若比值小于50%则为低表达，低表达与表达缺失均为异常表达。 1.3 统计学分析 应用SPSS 10.0统计软件，对定性RT-PCR结果进行χ2检验及确切概率法；对半定量RT-PCR结果进行t检验。 2 结 果 2.1 食管癌组织和癌旁组织中MAL mRNA的定性检查结果比较 45例食管癌组织中未见MAL表达者28例，弱表达者12例；癌旁组织食管黏膜组织MAL mRNA全部呈阳性表达。食管癌组织中MAL mRNA表达明显低于相应的癌旁食管黏膜组织，差异有显著性(χ2=30.59,P 0.01)。见图1。 图1 RT-PCR检测食管癌组织MAL mRNA的表达 ①、②为食管癌组织MAL mRNA表达阳性；③、④为食管癌组织MAL mRNA表达阴性；⑤为X174/HaeⅢ分子质量标志物 2.2 MAL mRNA的半定量RT-PCR