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Notch1基因在人脑胶质瘤中的表达及其意义论文.doc
Notch1基因在人脑胶质瘤中的表达及其意义论文
易海波 石松生 杨卫忠 陈春美
【摘要】 目的 研究Notch1在人脑胶质瘤中的表达,并对其表达与胶质瘤病理级别的关系进行研究,探讨Notch1对人脑胶质瘤发生、发展所起的作用,从而为胶质瘤的治疗提供一定的理论依据。方法 应用半定量RTPCR方法检测70例人脑胶质瘤标本和12例正常脑组织中的Notch1 mRNA的表达。结果 Notch1 mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均可表达,且在人脑胶质瘤中的表达显著高于正常脑组织(P 0.01);人脑胶质瘤Ⅰ~ Ⅱ级组和Ⅲ~Ⅳ级组中Notch1 mRNA表达均显著高于正常脑组织(P 0.01),并且Notch1 mRNA在人脑胶质瘤Ⅲ~Ⅳ级组中的表达显著高于Ⅰ~ Ⅱ级组(P 0.01)。结论 Notch1 mRNA在人脑胶质瘤和正常脑组织中均表达,且在人脑胶质瘤中呈显著高表达,可能与人脑胶质瘤的发生、发展有关;Notch1的表达与人脑胶质瘤的病理分级相关。
【关键词】 Notch1 胶质瘤 RTPCR
The Expression and Significance of Notch1 Gene in Human Gliomas
Key a;RTPCR
Notch信号通路是一个既简单又复杂的信号通路.freelega公司),Taq DNA聚合酶(上海普洛麦格公司)。
Notch1引物序列为利用Primier 5.0软件自行设计。
Notch1:上游引物序列:5’CGT GCA GAG TGA GAC CGT GGA3’ 下游引物序列:5’TGC GGT CTG TCT GGT TGT GCA3’
扩增片断长度为599bp。
βactin:上游引物序列:5’CGA GAA GAT GAC CCA GAT CA3’下游引物序列:5’GAT CTT CAT GAG GTA GTC AG 3’
扩增片断长度为234bp。
1.3 方法
1.3.1采用TRIzol法提取组织总RNA取少量组织总RNA,琼脂糖凝胶电泳测试RNA完整。
1.3.2按RTPCR kit(二步法)说明书进行cDNA的合成取1μg RNA至于PCR管,70℃孵育10 min后,稍离心放置冰上。加入MgCl2 4μl,10×Buffer 2μl,dNTP 2μl,RNasin 0.5μl,Oligo(dT)15引物 1μl,AMV反转录酶0.75μl,加ddH2O补足至20μl,将反应体系于42℃ 60min,95 ℃ 5min,4℃ 5min。
1.3.3PCR反应体系cDNA 2μl,dNTP 0.9μl,MgCl2 3.75μl,10×PCR buffer 4.9μl,上下游引物(20pmol/μl)各1.25μl,Taq DNA聚合酶0.25μl,加ddH20补至50μl,混匀,离心。反应条件:94℃预变性5min;变性94℃ 30s,退火58℃ 40s,延伸72℃ 40s,共35个循环,最后72℃延伸10min。
1.3.4取 PCR产物5μl,1.2%琼脂糖凝胶电泳(电压100V,时间25min)。将电泳凝胶置于凝胶图像分析系统(Gel Doc 2 000)半定量分析。
1.4 统计学分析
凝胶图像分析系统进行灰度分析,结果以±s表示,采用SPSS 13.0统计学软件进行统计学分析。
2结果
2.1总RNA完整性鉴定
各组RNA均可见完整的18S和28S亚基,见图1。
1:正常脑组织;2: Ⅰ级人脑胶质瘤;3:Ⅱ级人脑胶质瘤;
4:Ⅲ级人脑胶质瘤;5:Ⅳ级人脑胶质瘤
图1各组总RNA完整性鉴定
2.2Notch1 RTPCR产物电泳结果
70例人脑胶质瘤和12例正常脑组织均可见表达Notch1 mRNA,其RTPCR产物电泳结果,见图2。
M:marker;1:正常脑组织;2:Ⅰ级人脑胶质瘤;3:Ⅲ级人脑胶质瘤
图2Notch1 RTPCR产物电泳结果
2.3四组实验病例的Notch1 mRNA表达水平
对照组和胶质瘤组行两样本t检验,得出P 0.01,表明人脑胶质瘤Notch1 mRNA表达显著高于正常脑组织。再将对照组、胶质瘤Ⅰ~Ⅱ级组和胶质瘤Ⅲ~Ⅳ级组行单因子方差分析(Oneann RS,Mitsiadis E,et al.Human ligands of the Notch receptor[J].Am J Pathol,1999,154(3):785794.
3Zagouras P,Stifani S,Blaumueller CM,.freelan cervixJ.Proc Natl Acad Sci U S A,199
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